[發明專利]小麥矮腥黑粉菌原生質體的制備方法

在審

• 申請號: 201710328722.3
• 申請日: 2017-05-11
• 公開（公告）號: CN107058132A
• 公開（公告）日: 2017-08-18
• 發明（設計）人: 高利;沈慧敏;陳萬權;劉太國;劉博
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院植物保護研究所
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12R1/645
• 代理公司: 北京海虹嘉誠知識產權代理有限公司11129
• 代理人: 高芬芳

1.小麥矮腥黑粉菌原生質體的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

(1)菌絲培養：在土壤浸提液培養基上培養小麥矮腥黑粉菌冬孢子，待冬孢子萌發后轉接到T19液體培養基中振蕩培養，在土壤浸提液培養基上培養的天數與在T19液體培養基中振蕩培養的天數總共為40～50天，收集菌絲體；

(2)細胞壁裂解：以KCl溶液作為滲透壓穩定劑，配制混合酶液，加入到菌絲體中，28℃振蕩酶解2～3小時，即得到小麥矮腥黑粉菌原生質體；

所述混合酶液包括質量百分比濃度為1.5％的崩潰酶、1.5％的溶壁酶和1.5％的蝸牛酶。

2.根據權利要求1所述的小麥矮腥黑粉菌原生質體的制備方法，其特征在于，所述在土壤浸提液培養基上培養的天數與在T19液體培養基中振蕩培養的天數總共為45天。

3.根據權利要求2所述的小麥矮腥黑粉菌原生質體的制備方法，其特征在于，所述在土壤浸提液培養基上培養小麥矮腥黑粉菌冬孢子的天數為30～35天，所述轉接到T19液體培養基中振蕩培養的天數為10～15天。

4.根據權利要求1所述的小麥矮腥黑粉菌原生質體的制備方法，其特征在于，所述28℃振蕩酶解的時間為2.5小時。

5.根據權利要求1所述的小麥矮腥黑粉菌原生質體的制備方法，其特征在于，所述在土壤浸提液培養基上培養小麥矮腥黑粉菌冬孢子的培養條件為溫度為5℃和相對濕度為50％；所述轉接到T19液體培養基中振蕩培養的培養條件為溫度為5℃和轉速為150rpm。

6.根據權利要求1所述的小麥矮腥黑粉菌原生質體的制備方法，其特征在于，所述KCl溶液的濃度為1.2mol/L。

7.根據權利要求1所述的小麥矮腥黑粉菌原生質體的制備方法，其特征在于，所述混合酶液與所述菌絲體的配比為20ml：1g。

8.根據權利要求1所述的小麥矮腥黑粉菌原生質體的制備方法，其特征在于，所述振蕩酶解在180r/min的轉速下進行。

9.根據權利要求1所述的小麥矮腥黑粉菌原生質體的制備方法，其特征在于，所述土壤浸提液培養基的制備方法為：稱取75g滅菌土壤，溶于500ml沸水后，過濾，取濾液，加入20g瓊脂粉，然后加水定容至1L，121℃高壓蒸汽滅菌。

10.根據權利要求1所述的小麥矮腥黑粉菌原生質體的制備方法，其特征在于，所述T19液體培養基的配方為：KH₂PO₄ 613mg/L，MgSO₄·7H₂O 246mg/L，K₂HPO₄·3H₂O 114mg/L，CaCl₂55.5mg/L，螯合Fe 20mg/L，ZnSO₄·7H₂O 3.52mg/L，CuSO₄·5H₂O 0.38mg/L，MnSO₄·H₂O 0.31mg/L，Na₂MoO₄·2H₂O 0.025mg/L，氯化硫胺素5mg/L，L-天冬酰胺3mg/L，蔗糖20mg/L。