[發(fā)明專利]一種沙門氏菌抗體乳膠凝集檢測(cè)方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710326771.3
• 申請(qǐng)日: 2017-05-10
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN107085103A
• 公開(kāi)（公告）日: 2017-08-22
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 何偉勇;尹曉敏;陳曉鳳
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): G01N33/569
• 分類號(hào): G01N33/569
• 代理公司: 北京眾合誠(chéng)成知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司11246
• 代理人: 陳波

1.一種沙門氏菌抗體乳膠凝集檢測(cè)方法，其特征在于，包括以下步驟：

將SEN4030a蛋白，連接到空白乳膠微球上，制備致敏乳膠微球；

將致敏乳膠微球與待測(cè)樣品混勻反應(yīng)，觀察凝集結(jié)果。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)方法，其特征在于，所述SEN4030a蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的檢測(cè)方法，其特征在于，所述致敏乳膠微球的制備方法為：

將預(yù)處理后的空白乳膠微球溶液與SEN4030a蛋白溶液混合，在4-80℃下偶聯(lián)1-40小時(shí)。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的檢測(cè)方法，其特征在于，所述空白乳膠微球溶液的濃度為0.1-10wt％，所述SEN4030a蛋白溶液的濃度為0.1-5mg/ml。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的檢測(cè)方法，其特征在于，在10-40℃下偶聯(lián)3-10小時(shí)，所述空白乳膠微球溶液的濃度為0.1-3wt％，所述SEN4030a蛋白溶液的濃度為0.1-3mg/ml。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的檢測(cè)方法，其特征在于，在37℃下偶聯(lián)5小時(shí)，所述空白乳膠微球溶液的濃度為1wt％，所述SEN4030a蛋白溶液的濃度為0.6-0.7mg/ml。

7.根據(jù)權(quán)利要求3所述的檢測(cè)方法，其特征在于，所述預(yù)處理的方法為：將空白乳膠微球加入去離子水，離心，再加入緩沖液稀釋，然后加入TritonX-100。

8.根據(jù)權(quán)利要求1-7所述的檢測(cè)方法，其特征在于，所述SEN4030a蛋白的制備方法為：

根據(jù)腸炎沙門氏菌(Salmonella enteritis)的SEN4030a的基因序列，如SEQ ID No.2所示，設(shè)計(jì)引物克隆目的基因，構(gòu)建其PET-32a表達(dá)載體，轉(zhuǎn)化至工程菌中BL21中進(jìn)行蛋白誘導(dǎo)表達(dá)，然后分離純化SEN4030a蛋白。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的檢測(cè)方法，其特征在于，所述蛋白誘導(dǎo)表達(dá)的方法為：將細(xì)菌培養(yǎng)至OD600nm為0.4-0.8時(shí)，加入IPTG培養(yǎng)1-7h，其中IPTG濃度為0.1-3mm/mL；

所述分離純化的方法為：裂菌后收集上清，上層析柱，然后透析。

10.一種沙門氏菌蛋白乳膠凝集檢測(cè)試劑盒，其特征在于，包括：

SEN4030a蛋白溶液、空白乳膠微球懸濁液；

緩沖溶液A、處理液B；

所述緩沖溶液A為40mmol/L的MES緩沖液；處理液B為體積濃度為0.05％的Triton X-100溶液。