[發(fā)明專利]一種異種脫細(xì)胞真皮基質(zhì)的制備方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710323525.2
• 申請(qǐng)日: 2017-05-10
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN107412867B
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-09-01
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 車七石
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 廣州潤(rùn)虹醫(yī)藥科技股份有限公司
• 主分類號(hào): A61L27/36
• 分類號(hào): A61L27/36;A61L27/50;A61L27/54;A61L27/60
• 代理公司: 廣州科沃園專利代理有限公司 44416
• 代理人: 張帥

本發(fā)明涉及一種異種脫細(xì)胞真皮基質(zhì)的制備方法，其包括以下步驟：以巴馬香豬皮為皮源，皮鼓反取成斷層皮片，經(jīng)過(guò)去皮、脫細(xì)胞等步驟處理得到脫細(xì)胞真皮，進(jìn)一步將脫細(xì)胞真皮與羧甲基殼聚糖進(jìn)行反應(yīng)制成脫細(xì)胞真皮基質(zhì)，最后經(jīng)柔化劑、保濕劑的處理，使制得的脫細(xì)胞真皮基質(zhì)更接近人體皮膚的自然狀態(tài)，提高其使用的依從性。經(jīng)本發(fā)明方法制得的異種脫細(xì)胞真皮基質(zhì)免疫原性低，并有保持真皮膠原纖維的三維結(jié)構(gòu)的立體構(gòu)造，提高真皮膠原纖維的三維結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性，且具有較佳的生物相容性。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于組織工程皮膚技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種異種脫細(xì)胞真皮基質(zhì)的制備方法。

背景技術(shù)

燒傷、創(chuàng)傷、上皮癌切除及皮膚疾病等因素造成的皮膚缺損常遺留瘢痕增生和攣縮畸形，嚴(yán)重影響外觀和功能。目前，用于修復(fù)創(chuàng)面的修復(fù)材料除了自體皮、皮瓣外，主要有異體皮、異種皮以及各種人工合成的創(chuàng)面覆蓋物。在治療大面積燒傷患者時(shí)，患者自體皮源有限，就需要應(yīng)用這些皮膚替代物；異體皮來(lái)源有限，并有傳染疾病的風(fēng)險(xiǎn)，且受到倫理學(xué)的制約；人工合成材料技術(shù)尚不成熟，抗感染能力較差，且價(jià)格昂貴。因此尋求能植入人體內(nèi)，組織相容好，免疫性低的用于燒傷、整形美容及作為組織填充物的異種真皮是目前國(guó)內(nèi)外研究的熱點(diǎn)。

脫細(xì)胞真皮基質(zhì)(acellular dermal matrix，ADM)是一種去表皮、脫細(xì)胞，無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)、無(wú)毒性、無(wú)刺激性、無(wú)免疫排斥反應(yīng)，有彈性、質(zhì)地柔軟、不斷裂的組織工程學(xué)材料，主要應(yīng)用于組織創(chuàng)面修復(fù)。脫細(xì)胞真皮基質(zhì)取材于天然的皮膚組織，經(jīng)過(guò)特殊的理化處理，將組織中可能引起人體植入后的免疫排異反應(yīng)的成分去除，同時(shí)保留了原有組織的立體支架結(jié)構(gòu)，可誘導(dǎo)成纖維細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞長(zhǎng)入，具有誘導(dǎo)組織再生的作用，是治療需要植皮的全層皮膚缺損有效的方法。但是，已有的脫細(xì)胞真皮基質(zhì)生產(chǎn)工藝存在以下不足：不能有效去除異種皮細(xì)胞，降低異種皮膚抗原性的同時(shí)保留完整的真皮膠原纖維的三維結(jié)構(gòu)；脫細(xì)胞真皮基質(zhì)在制備過(guò)程中，透明質(zhì)酸、硫酸皮膚素、硫酸肝素等細(xì)胞外無(wú)定形基質(zhì)成分也隨細(xì)胞成分同時(shí)被洗出，使膠原支架失去原有的外環(huán)境保護(hù)，移植于創(chuàng)面后，降解速度較快，存在局部溶解傾向；此外，脫細(xì)胞真皮基質(zhì)在使用時(shí)容易容易導(dǎo)致創(chuàng)面感染。因此臨床上迫切需要一種低免疫原性、可供移植的皮膚替代物。

公開(kāi)號(hào)為CN 102580153 B的中國(guó)專利申請(qǐng)“一種制備脫細(xì)胞真皮基質(zhì)醫(yī)用組織補(bǔ)片的方法”，將動(dòng)物皮膚通過(guò)制備斷層皮片、病毒滅活、脫脂、脫細(xì)胞、凍干、裁剪、成型、包裝和輻照消毒工藝后得到脫細(xì)胞真皮基質(zhì)醫(yī)用組織補(bǔ)片，具有脫細(xì)胞徹底，對(duì)真皮細(xì)胞外基質(zhì)天然結(jié)構(gòu)損害輕的優(yōu)點(diǎn)。

發(fā)明內(nèi)容

為解決現(xiàn)有技術(shù)存在的問(wèn)題，本發(fā)明的目的在于提供一種異種脫細(xì)胞真皮基質(zhì)的制備方法。

本發(fā)明提供的技術(shù)方案為如下：

本發(fā)明提供一種異種脫細(xì)胞真皮基質(zhì)的制備方法，其包括以下步驟：

(1)選用巴馬香豬皮為皮源，對(duì)取皮區(qū)進(jìn)行脫毛、消毒，用取皮機(jī)取下大張皮膚，無(wú)菌生理鹽水清洗，皮鼓反取成0.25～0.5mm的斷層皮片，采用激光打孔技術(shù)對(duì)斷層皮片進(jìn)行制孔，備用；

(2)將步驟(1)制得的斷層皮片浸泡于0.5～1.0％(m/v)的鄰苯基苯酚鈉水溶液中，處理6～8min，無(wú)菌生理鹽水清洗3～4次，然后加入1～2％(m/v)三羥甲基甲胺基乙磺酸水溶液，超聲震蕩處理6～12h，每2h更換一次溶液，其中加入的三羥甲基甲胺基乙磺酸水溶液與斷層皮片的重量比為10:1，得到去表皮的真皮；

(3)將步驟(2)得到的去表皮的真皮置于0.2～0.4％TritonX-100(v/v)溶液中，室溫下振蕩洗滌6～12h，用含4000U/L慶大霉素生理鹽水溶液洗滌3次，加入脫細(xì)胞處理液，在37℃條件下作用12～24h，所述的脫細(xì)胞處理液與去表皮的真皮的重量比為10:1，用含4000U/L慶大霉素生理鹽水溶液洗滌3次，再用無(wú)菌生理鹽水清洗3～4次，得到脫細(xì)胞真皮；