[發明專利]一種異種脫細胞真皮基質的制備方法

有效

• 申請號: 201710323525.2
• 申請日: 2017-05-10
• 公開（公告）號: CN107412867B
• 公開（公告）日: 2020-09-01
• 發明（設計）人: 車七石
• 申請（專利權）人: 廣州潤虹醫藥科技股份有限公司
• 主分類號: A61L27/36
• 分類號: A61L27/36;A61L27/50;A61L27/54;A61L27/60
• 代理公司: 廣州科沃園專利代理有限公司 44416
• 代理人: 張帥

1.一種異種脫細胞真皮基質的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)選用巴馬香豬皮為皮源，對取皮區進行脫毛、消毒，用取皮機取下大張皮膚，無菌生理鹽水清洗，皮鼓反取成0.25～0.5mm的斷層皮片，采用激光打孔技術對斷層皮片進行制孔，備用；

(2)將步驟(1)制得的斷層皮片浸泡于0.5～1.0％(m/v)的鄰苯基苯酚鈉水溶液中，處理6～8min，無菌生理鹽水清洗3～4次，然后加入1～2％(m/v)三羥甲基甲胺基乙磺酸水溶液，超聲震蕩處理6～12h，每2h更換一次溶液，其中加入的三羥甲基甲胺基乙磺酸水溶液與斷層皮片的重量比為10:1，得到去表皮的真皮；

(3)將步驟(2)得到的去表皮的真皮置于0.2～0.4％TritonX-100(v/v)溶液中，室溫下振蕩洗滌6～12h，用含4000U/L慶大霉素生理鹽水溶液洗滌3次，加入脫細胞處理液，在37℃條件下作用12～24h，所述的脫細胞處理液與去表皮的真皮的重量比為10:1，用含4000U/L慶大霉素生理鹽水溶液洗滌3次，再用無菌生理鹽水清洗3～4次，得到脫細胞真皮；

(4)將步驟(3)得到的脫細胞真皮放入轉鼓中，然后分次加入溫度為35℃、pH為5.7的羧甲基殼聚糖溶液，反應30min后調節pH值至5.0，再反應75min，調節pH值至6.8，處理完畢后放凈廢液，再將處理后的材料用無菌生理鹽水洗2次，每次15分鐘，洗后控干水，得到脫細胞真皮基質；

(5)將經步驟(4)處理得到的脫細胞真皮基質浸泡于體積濃度為0.1～0.3％(v/v)的戊二醛溶液中交聯15～30min，無菌生理鹽水沖洗10～15min，然后置于柔化劑溶液中浸泡30～60min，清洗后再放入保濕劑溶液中，37℃保溫處理30～60min，最后用無菌生理鹽水充分沖洗去除殘留；

(6)將經步驟(5)處理得到的脫細胞真皮基質放入冷凍干燥機的冷凍室內凍干后，成型包裝，再經γ射線輻照消毒滅菌，即為成品；

所述步驟(2)中的三羥甲基甲胺基乙磺酸水溶液含有1～3％(m/v)三聚磷酸鈉、0.01～0.04％(v/v)的二丙二醇二甲醚和0.1～0.4％(m/v)聚乙二醇15-羥基硬脂酸酯；

所述步驟(3)脫細胞處理液為含有0.025％(m/v)的胰酶、0.02％(m/v)EDTA、0.4～1.0％(m/v)十二酰基甘氨酸鈉和0.1～1.0％(m/v)聚乙二醇15-羥基硬脂酸酯，濃度為1～2％(m/v)三羥甲基甲胺基乙磺酸水溶液。

2.根據權利要求1所述的異種脫細胞真皮基質的制備方法，其特征在于，所述步驟(2)中的鄰苯基苯酚鈉水溶液含有0.01～0.1％(v/v)的二丙二醇二甲醚。

3.根據權利要求1所述的異種脫細胞真皮基質的制備方法，其特征在于，所述步驟(4)中脫細胞真皮與羧甲基殼聚糖溶液的重量比為1:2～4。

4.根據權利要求1所述的異種脫細胞真皮基質的制備方法，其特征在于，所述步驟(5)中的柔化劑選自十六烷基三甲基氯化銨、十六烷基三甲基溴化銨、十七烷基-N-氨乙基咪唑啉環氧丙烷、十八烷基二甲基芐基氯化銨中的至少一種。

5.根據權利要求1所述的異種脫細胞真皮基質的制備方法，其特征在于，所述步驟(5)中的柔化劑溶液濃度為1～5％(m/v)。

6.根據權利要求1所述的異種脫細胞真皮基質的制備方法，其特征在于，所述步驟(5)中的保濕劑選自丙三醇、透明質酸、吡咯烷酮羧酸鈉、二甲基氨酸脯氨酸、十八烷基二甲基氧化胺中的至少一種。

7.根據權利要求1所述的異種脫細胞真皮基質的制備方法，其特征在于，所述步驟(5)中的保濕劑溶液濃度為0.2～1％(m/v)。