[發明專利]一種人肝細胞癌發生發展相關的長鏈非編碼RNA、擴增檢測方法及應用

有效

• 申請號: 201710320450.2
• 申請日: 2017-05-09
• 公開（公告）號: CN107022625B
• 公開（公告）日: 2020-06-19
• 發明（設計）人: 彭麗;李官成;蔣斌元;袁小青
• 申請（專利權）人: 中南大學
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12N15/11;C12N15/113;A61K48/00;A61K31/7088;A61P35/00
• 代理公司: 長沙正奇專利事務所有限責任公司 43113
• 代理人: 盧宏;周棟

本發明公開了一種人肝細胞癌發生發展相關的長鏈非編碼RNA、擴增檢測方法及應用。本發明首次發現并克隆了一個新的長鏈非編碼RNA基因序列，并通過實驗證明該基因在肝細胞癌中的特異性表達與肝細胞癌的惡性程度及轉移能力有關，該基因具有肝細胞癌輔助診斷、肝細胞癌基因治療及肝細胞癌預后預測的用途。發明也提供了該基因的RNAi靶序列、用于RNAi干擾的短發夾片段，二者具有抑制該基因表達的能力，具有肝細胞癌的輔助診斷和基因治療的用途。

技術領域

本發明屬于腫瘤分子生物學領域，具體涉及一種人肝細胞癌發生發展相關的長鏈非編碼RNA、擴增檢測方法及應用。

背景技術

肝細胞癌(hepatocellular carcinoma，HCC)是一種常見的惡性腫瘤，占整個原發性肝癌(Liver Cancer)的90％以上。全世界每年發病估計不少于一百萬新患者，占惡性腫瘤發病率第6位，死亡率第2位，每年約60萬人死于肝癌。據全國的幾次死亡回顧調查顯示我國70年代、90年代及21世紀初的肝癌在全部惡性腫瘤死亡中占前3位，是威脅健康和生命的主要疾病之一。我國HCC多發生在慢性肝炎或肝硬化的基礎上，高度惡性和復雜難治；且我國人口基數大的事實，HBV、HCV感染人群的增加及人口老齡化，今后一段時間內肝癌的發生率可能仍將上升。肝癌患者的預后差，儼然已嚴重威脅世界和我國人民的健康和生命，也給患者家屬帶來了沉重的經濟負擔和精神壓力。因此，研究HCC的發病機制、新型治療靶點及早期診斷/預后生物標記物迫在眉睫。

長鏈非編碼RNAs(Long non-coding RNAs，lncRNAs)是一類長度大于200nucleotides(nt)的不具備編碼蛋白質能力的功能性RNA分子，其具有許多類似mRNA的結構，如poly(A)尾、5’帽子結構和啟動子。它位于細胞核或者細胞質中，可被選擇性剪接或聚腺苷酸化。LncRNAs曾被認為是基因轉錄過程中的“噪音”。但隨著高通量測序和其它新興研究技術的涌現，lncRNAs的生物學功能逐漸被研究并得到認可。越來越多的證據表明lncRNAs在廣泛的生物學過程中發揮重要作用，其包含細胞生長、遷移、侵襲和分化等。然而，lncRNAs在人類肝細胞癌中的生物學功能和分子機制有待闡明。

2015年美國總統奧巴馬宣布精準醫學計劃(Precision Medicine Initiative)的啟動，引起了全世界的廣泛關注。精準醫學(Precision Medicine)是以個性化醫療為基礎，聯合最新分子遺傳學檢測技術對遺傳物質及相關分子進行檢測，這就要求我們探索更多的新型分子，以更深入、更準確和更全面地反映疾病(肝細胞癌也不例外)的本質特征，為疾病診斷和治療以及健康管理。

發明內容

本發明旨在克服現有技術的不足，提供一種人肝細胞癌發生發展相關的長鏈非編碼RNA、擴增檢測方法及應用。

為實現本發明的上述目的，本發明采用如下的技術方案：

本發明所述人肝細胞癌發生發展相關的長鏈非編碼RNA的序列如SEQ ID NO.1所示，將其在NCBI數據庫中進行比對，發現其是在LOC105371083的基礎上5’延長了86個核苷酸(catgcgtaga taaaagtaaa taaacgccct caagttagga atgaacggag gaaatgggttaaacgagaat aaataattga aggcaga)，3’增加了多聚A尾(aaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaa)。該長鏈非編碼RNA可用于制備診斷、治療或預后預測肝細胞癌試劑或藥物。該長鏈非編碼RNA的DNA序列如SEQ ID NO.6所示。用于該長鏈非編碼RNA中siRNA的作用靶序列的序列如SEQ IDNO.7至SEQ ID NO.10任一所示。這些靶序列可用于制備診斷、治療或預后預測肝細胞癌疾病的藥物。用于該長鏈非編碼RNA中RNAi用的短發夾片段shRNA的序列如SEQ ID NO.11或SEQ ID NO.12所示。這些短發夾片段shRNA可用于制備診斷、治療或預后預測肝細胞癌疾病的藥物。以上這些序列可以進一步構建成載體或重組子。