[發(fā)明專利]提高大豆轉(zhuǎn)化效率的方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201710319417.8 | 申請日： | 2017-05-09 |
| 公開（公告）號： | CN107099548B | 公開（公告）日： | 2020-11-03 |
| 發(fā)明（設計）人： | 劉雁華;王媛媛;賈志偉;宋慶芳 | 申請（專利權(quán)）人： | 北京大北農(nóng)生物技術(shù)有限公司 |
| 主分類號： | C12N15/82 | 分類號： | C12N15/82;A01H5/00;A01H6/54 |
| 代理公司： | 暫無信息 | 代理人： | 暫無信息 |
| 地址： | 100193 北京市海淀區(qū)圓明園西*** | 國省代碼： | 北京;11 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 提高 大豆 轉(zhuǎn)化 效率 方法 | ||
1.一種選擇轉(zhuǎn)化的大豆分生組織塊的方法，其特征在于，包括：
使用含有編碼磺酰脲類除草劑水解酶的基因的重組載體，轉(zhuǎn)化大豆分生組織塊；
其中，所述磺酰脲類除草劑水解酶的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示；
通過滴加苯磺隆對上述轉(zhuǎn)化后的大豆分生組織塊進行篩選培養(yǎng)，以編碼磺酰脲類除草劑水解酶的基因作為選擇標記物，其中，篩選培養(yǎng)基的濃度為，每毫升增殖培養(yǎng)基滴加苯磺隆1-7μg；
選擇未被殺死和/或未被抑制的大豆分生組織塊。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述選擇轉(zhuǎn)化的大豆分生組織塊的方法，其特征在于，所述轉(zhuǎn)化大豆分生組織塊為通過農(nóng)桿菌介導過程轉(zhuǎn)化大豆分生組織塊。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述選擇轉(zhuǎn)化的大豆分生組織塊的方法，其特征在于，每毫升增殖培養(yǎng)基滴加苯磺隆3μg。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述選擇轉(zhuǎn)化的大豆分生組織塊的方法，其特征在于，滴加苯磺隆前在增殖培養(yǎng)基中培養(yǎng)5-9天。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述選擇轉(zhuǎn)化的大豆分生組織塊的方法，其特征在于，滴加苯磺隆前在增殖培養(yǎng)基中培養(yǎng)7天。
6.根據(jù)權(quán)利要求3所述選擇轉(zhuǎn)化的大豆分生組織塊的方法，其特征在于，滴加苯磺隆前在增殖培養(yǎng)基中培養(yǎng)5-9天。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述選擇轉(zhuǎn)化的大豆分生組織塊的方法，其特征在于，滴加苯磺隆前在增殖培養(yǎng)基中培養(yǎng)7天。
8.一種由農(nóng)桿菌介導且以編碼磺酰脲類除草劑水解酶的基因作為選擇標記物來制備轉(zhuǎn)基因植物的方法，其中，包括：
制備至少包括能被農(nóng)桿菌菌株轉(zhuǎn)化的大豆分生組織塊的外植體；
將至少包括所述外植體中所述大豆分生組織塊的區(qū)域接觸至少包含編碼磺酰脲類除草劑水解酶的基因的農(nóng)桿菌菌株；
其中，所述磺酰脲類除草劑水解酶的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示；
通過滴加苯磺隆對所述外植體進行篩選培養(yǎng)，其中，篩選培養(yǎng)基的濃度為，每毫升增殖培養(yǎng)基滴加苯磺隆1-7μg；
選擇未被殺死和/或未被抑制的轉(zhuǎn)化大豆分生組織塊；
通過滴加苯磺隆對所述篩選到的大豆分生組織塊進行分化培養(yǎng)，其中，分化培養(yǎng)基的濃度為，每毫升分化培養(yǎng)基滴加苯磺隆3-7μg；
所述轉(zhuǎn)化大豆分生組織塊再生成植物。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述由農(nóng)桿菌介導且以編碼磺酰脲類除草劑水解酶的基因作為選擇標記物來制備轉(zhuǎn)基因植物的方法，其特征在于，所述外植體為有子葉的外植體、半粒種子外植體或半胚胎種子外植體。
10.根據(jù)權(quán)利要求8或9所述由農(nóng)桿菌介導且以編碼磺酰脲類除草劑水解酶的基因作為選擇標記物來制備轉(zhuǎn)基因植物的方法，其特征在于，每毫升增殖培養(yǎng)基滴加苯磺隆3μg。
11.根據(jù)權(quán)利要求8或9所述由農(nóng)桿菌介導且以編碼磺酰脲類除草劑水解酶的基因作為選擇標記物來制備轉(zhuǎn)基因植物的方法，其特征在于，滴加苯磺隆前在增殖培養(yǎng)基中培養(yǎng)5-9天。
12.根據(jù)權(quán)利要求11所述由農(nóng)桿菌介導且以編碼磺酰脲類除草劑水解酶的基因作為選擇標記物來制備轉(zhuǎn)基因植物的方法，其特征在于，滴加苯磺隆前在增殖培養(yǎng)基中培養(yǎng)7天。
13.根據(jù)權(quán)利要求10所述由農(nóng)桿菌介導且以編碼磺酰脲類除草劑水解酶的基因作為選擇標記物來制備轉(zhuǎn)基因植物的方法，其特征在于，滴加苯磺隆前在增殖培養(yǎng)基中培養(yǎng)5-9天。
14.根據(jù)權(quán)利要求13所述由農(nóng)桿菌介導且以編碼磺酰脲類除草劑水解酶的基因作為選擇標記物來制備轉(zhuǎn)基因植物的方法，其特征在于，滴加苯磺隆前在增殖培養(yǎng)基中培養(yǎng)7天。
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