[發(fā)明專利]一種從酵母發(fā)酵液中分離人血白蛋白的混合模式層析方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710317433.3
• 申請日: 2017-05-05
• 公開（公告）號: CN107033236B
• 公開（公告）日: 2021-03-23
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 林東強(qiáng);褚文寧;吳啟賜;姚善涇
• 申請（專利權(quán)）人: 浙江大學(xué)
• 主分類號: C07K14/765
• 分類號: C07K14/765;C07K1/16
• 代理公司: 杭州求是專利事務(wù)所有限公司 33200
• 代理人: 鄭海峰

1.一種從酵母發(fā)酵液中分離人血白蛋白的混合模式層析方法，其特征在于包括如下步驟：

1）取含有人血白蛋白的酵母發(fā)酵液，通過離心去除酵母細(xì)胞，調(diào)節(jié)pH至6.0，加入辛酸鈉至5~20 mM，68^oC加熱30 min，用離心機(jī)以8000～10000 rpm轉(zhuǎn)速離心10～20 min，取上清液，得到人血白蛋白粗品溶液；所述的含有人血白蛋白的酵母發(fā)酵液為畢赤酵母表達(dá)重組人血白蛋白的發(fā)酵液，或者釀酒酵母表達(dá)重組人血白蛋白的發(fā)酵液；

2）調(diào)節(jié)人血白蛋白粗品溶液的pH至4.0～4.5，用0.45 μm濾膜過濾后，上樣到填充有以色氨酸為配基的混合模式介質(zhì)的層析柱中，平衡緩沖液沖洗，洗脫緩沖液洗脫，收集洗脫峰對應(yīng)的洗脫緩沖液，得到人血白蛋白溶液；

3）將人血白蛋白溶液脫鹽，冷凍干燥，得到純度大于95%的人血白蛋白；

所述的混合模式介質(zhì)為以酰胺鍵偶聯(lián)色氨酸氨基作為配基的層析介質(zhì)；

所述的平衡緩沖液pH值為4.0~4.5；

所述的洗脫緩沖液pH值為7.0～9.0。

2.如權(quán)利要求1所述的一種從酵母發(fā)酵液中分離人血白蛋白的混合模式層析方法，其特征在于所述的平衡緩沖液為乙酸-乙酸鈉緩沖液。

3.如權(quán)利要求1所述的一種從酵母發(fā)酵液中分離人血白蛋白的混合模式層析方法，所述的洗脫緩沖液為磷酸二氫鈉-磷酸氫二鈉緩沖液、Tris-鹽酸緩沖液或者甘氨酸-氫氧化鈉緩沖液，添加0 - 0.6 M NaCl。

4.如權(quán)利要求1所述的一種從酵母發(fā)酵液中分離人血白蛋白的混合模式層析方法，其特征在于所述的步驟1）中調(diào)節(jié)酵母發(fā)酵液pH值和步驟3）人血白蛋白粗品溶液的pH調(diào)節(jié)所用酸溶液為乙酸或檸檬酸溶液，所用堿溶液為氫氧化鈉溶液。