[發明專利]一種快速鑒定小麥鐮刀菌莖腐病的方法

在審

• 申請號: 201710317289.3
• 申請日: 2017-05-08
• 公開（公告）號: CN108220385A
• 公開（公告）日: 2018-06-29
• 發明（設計）人: 劉易科;高春保;朱展望;鄒娟;佟漢文;陳泠;張宇慶
• 申請（專利權）人: 湖北省農業科學院糧食作物研究所
• 主分類號: C12Q1/18
• 分類號: C12Q1/18;C12R1/77
• 代理公司: 常州佰業騰飛專利代理事務所(普通合伙) 32231
• 代理人: 高姍

一種快速鑒定小麥鐮刀菌莖腐病的方法，包括：一、禾谷鐮刀菌孢子懸液的制備；二、小麥種室溫下萌發至胚芽鞘長度為1.4～1.6cm；三、將胚芽鞘頂端剪去2mm～4mm，取禾谷鐮刀菌孢子懸液2～4μL，接種于胚芽鞘傷口處；四、在光照培養箱里培養7天，測量胚芽鞘病斑長度。本發明培養條件簡單；小麥鐮刀菌莖腐病接種簡單快速，由于胚芽鞘傷口的存在，吸收更快，可在較短的時間內鑒定出小麥鐮刀菌莖腐病的抗性水平，且不需要昂貴的儀器設備；可一次大量重復，而且統計方法準確度高，實驗成本低，省工省力，對小麥品種的鐮刀菌莖腐病抗性鑒定效果好，適于推廣應用。

技術領域

本發明屬于植物保護技術領域，具體為一種快速鑒定小麥鐮刀菌莖腐病的方法。

背景技術

小麥赤霉病是由鐮刀菌引起的一種世界范圍內廣泛流行的真菌病害。近年來，由于全球氣候變暖和耕作制度、耕作方式的改變，小麥赤霉病呈現逐年加重和大流行的趨勢，對農業生產構成嚴重威脅。小麥赤霉病除發生在穗期造成穗腐(穗腐，wheat scab)外，還可以在苗期發病(莖腐病，crown rot)，引起苗枯、基腐等癥狀。目前對小麥赤霉病穗腐己經進行了廣泛深入的研究，并取得了顯著的成就，但對由鐮刀菌引起的小麥苗期病害的研究在我國尚沒有引起重視，對莖腐病的研究較少,有關抗性鑒定方法以及評價標準的研究也比較缺乏。

在國外，天o天man和Wil天ermuth于1987年建立了一種小麥赤霉病苗期抗性(莖腐病)鑒定方法，Wil天ermuth和Mcnamara于1994年對這種方法進行了改進，但這兩種方法均需要進行大田接種，由于接種量多少不同、大田殘余病原菌、田間濕度和溫度等因素干擾，經常造成田間鑒定結果的重復性較差。Wallwork等(2004)、Mitter等(2006)和Li等(2008)均提出了在溫室中鑒定小麥苗期莖基腐病的方法，這些方法效果較好,但存在工序復雜，費時費力，而且試驗誤差較大。我國科學家在前人的研究基礎上對鐮刀菌引起的小麥莖腐病的鑒定方法也進行了研究，發現“棉球接種法”抗感材料間病情指數差異明顯，可以作為小麥莖腐病的抗性鑒定方法，但這種方法存在著接種困難，鑒定周期長的特點。周淼平等(2016)對采用熒光定量PCR方法測定基部莖稈的禾谷鐮刀菌天NA含量并與其莖腐病平均病級進行相關分析，建立了基于熒光定量PCR抗性評價方法，但這種方法存在對儀器設備要求高，后期鑒定費用高的特點。

目前我國小麥赤霉病的發病面積不斷擴大，危害程度日益加重，這些因素為小麥莖腐病的大面積發生創造了條件。因此，建立一種快速準確的小麥鐮刀菌莖腐病鑒定方法十分必要。

發明內容

為解決現有技術存在的小麥赤霉病的鑒定周期長，步驟煩瑣的缺陷，本發明提供一種快速鑒定小麥鐮刀菌莖腐病的方法。

一種快速鑒定小麥鐮刀菌莖腐病的方法，包括以下步驟：

一、禾谷鐮刀菌孢子懸液的制備；

二、將滅菌后的小麥種室溫下萌發至胚芽鞘長度為1.4～1.6cm；

三、將胚芽鞘頂端剪去2mm～4mm，取禾谷鐮刀菌孢子懸液2～4μL，接種于胚芽鞘傷口處，每個基因型重復接種15～25株，重復三次；

四、在光照培養箱里培養7天，測量胚芽鞘病斑長度，以三次試驗所有參試植株的平均病斑長度作為該品種的抗病性量化指標。

平均病斑長度越長，說明該品種的小麥鐮刀菌莖腐病抗性越差。

進一步的，所述的禾谷鐮刀菌孢子懸液的濃度為1*5×10⁵個/m L。

進一步的，所述的禾谷鐮刀菌孢子懸液的制備方法，包括以下步驟：

(1)禾谷鐮刀菌的活化取出于-20℃保存的禾谷鐮刀菌菌株，接種于PDA平板，于28℃，黑暗條件下培養3天；