[發明專利]一種快速鑒定小麥鐮刀菌莖腐病的方法在審
| 申請號： | 201710317289.3 | 申請日： | 2017-05-08 |
| 公開（公告）號： | CN108220385A | 公開（公告）日： | 2018-06-29 |
| 發明（設計）人： | 劉易科;高春保;朱展望;鄒娟;佟漢文;陳泠;張宇慶 | 申請（專利權）人： | 湖北省農業科學院糧食作物研究所 |
| 主分類號： | C12Q1/18 | 分類號： | C12Q1/18;C12R1/77 |
| 代理公司： | 常州佰業騰飛專利代理事務所(普通合伙) 32231 | 代理人： | 高姍 |
| 地址： | 430064 湖*** | 國省代碼： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 莖腐病 鐮刀菌 胚芽鞘 小麥 禾谷鐮刀菌 快速鑒定 孢子懸液 接種 光照培養箱 抗性鑒定 抗性水平 培養條件 實驗成本 小麥品種 儀器設備 準確度 傷口處 病斑 剪去 省工 省力 制備 傷口 測量 重復 吸收 統計 | ||
1.一種快速鑒定小麥鐮刀菌莖腐病的方法，其特征在于，包括以下步驟：
一、禾谷鐮刀菌孢子懸液的制備；
二、將滅菌后的小麥種室溫下萌發至胚芽鞘長度為1.4～1.6cm；
三、將胚芽鞘頂端剪去2mm～4mm，取禾谷鐮刀菌孢子懸液2～4μL，接種于胚芽鞘傷口處，每個基因型重復接種15～25株，重復三次；
四、在光照培養箱里培養7天，測量胚芽鞘病斑長度，以三次試驗所有參試植株的平均病斑長度作為該品種的抗病性量化指標。
2.如權利要求1所述的快速鑒定小麥鐮刀菌莖腐病的方法，其特征在于，所述的禾谷鐮刀菌孢子懸液的濃度為1*5×105個/mL。
3.如權利要求2所述的快速鑒定小麥鐮刀菌莖腐病的方法，其特征在于，所述的禾谷鐮刀菌孢子懸液的制備方法，包括以下步驟：
(1)禾谷鐮刀菌的活化取出于-20℃保存的禾谷鐮刀菌菌株，接種于PDA平板，于28℃，黑暗條件下培養3天；
(2)孢子的培養挑取活化的菌絲，接種于GGH液體培養基，于光照條件下，28℃培養5天～7天，產生分生孢子；
(3)孢子的收集用無菌紗布濾去菌絲，收集菌液于無菌三角瓶,5000r/min離心5min收集菌體，加入無菌水，用血球計數板調節孢子濃度至5×105個/mL；
(4)孢子的保存將孢子分裝至1.5mL離心管，在-20℃保存備用。
4.如權利要求1所述的快速鑒定小麥鐮刀菌莖腐病的方法，其特征在于，所述步驟二中小麥種滅菌的方法為：先用70％乙醇沖洗1min；無菌水快速沖洗后，用0.1％質量分數的HgCl2消毒5min～8min；無菌水沖洗3～4次，直到去除HgCl2污染。
5.如權利要求1或4所述的快速鑒定小麥鐮刀菌莖腐病的方法，其特征在于，所述步驟二中小麥種室溫下萌發時將小麥種子背部朝上，均勻地放置于鋪有濕潤濾紙的塑料盒內，于室溫條件下萌發2～5天。
6.如權利要求1所述的快速鑒定小麥鐮刀菌莖腐病的方法，其特征在于，所述步驟四中在26℃，16h光照，99％相對濕度的光照培養箱里培養。
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