[發(fā)明專利]鑒定靈長類抗體的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710312074.2
• 申請日: 2017-05-05
• 公開（公告）號: CN107435065B
• 公開（公告）日: 2021-06-25
• 發(fā)明（設計）人: 余國良
• 申請（專利權）人: 江蘇荃信生物醫(yī)藥有限公司
• 主分類號: C12Q1/6869
• 分類號: C12Q1/6869
• 代理公司: 北京彩和律師事務所 11688
• 代理人: 閆桑田

本申請?zhí)峁┝藦撵`長類動物中鑒定抗體的方法。在某些實施方式中，所述方法包括：對由合并的抗體生成B細胞群制備的cDNA進行測序，以獲得多個抗體重鏈序列和多個抗體輕鏈序列；基于其CDR3序列將獲得的抗體重鏈序列分成重鏈組；基于其CDR3序列將獲得的抗體輕鏈序列分成輕鏈組；基于每組中抗體重鏈或輕鏈序列的數(shù)量，將重鏈組與輕鏈組配對；在每個配對的重鏈組和輕鏈組對中，將一個抗體重鏈序列與一個輕鏈序列配對；并測試包含所述配對的重鏈和輕鏈序列的候選抗體與抗原結合的情況。

相關申請的引用

本申請要求2016年5月10提交的美國臨時申請62/333,941和2016年7月13日提交的美國申請15/208,850的優(yōu)先權。其公開內容在此參考并入。

背景技術

抗體已經(jīng)成為用于治療各種病癥，包括癌癥、炎癥和其它疾病的有效工具。然而，已經(jīng)證明非人抗體誘導人免疫應答，這導致施用的抗體的中和并限制了這種抗體在治療人類疾病中的應用。本領域嘗試通過人源化來自非人動物(例如小鼠和兔)的單克隆抗體來克服該問題。例如，人源化抗體可以通過將適當?shù)幕パa決定區(qū)(CDR)編碼區(qū)段移植到人抗體框架中來實現(xiàn)。然而，通過CDR移植方法人源化的抗體通常存在與其特異性靶標的親和力喪失的問題。

T細胞受體(TCR)是在T細胞表面發(fā)現(xiàn)的一種分子，負責識別與主要組織相容性復合體(MHC)分子結合的抗原。TCR和抗原之間的結合具有相對低的親和力并且是退化的，即許多TCRs識別相同的抗原，并且許多抗原被相同的TCR識別。TCR或特異性抗原的親和力使其具有用于治療的價值，例如使用過繼免疫治療的癌癥治療。為了擴大使用過繼性免疫治療的能力，有必要選擇富集的肽特異性效應T細胞，以有效攻擊腫瘤細胞并避免對正常組織的攻擊。為此目的，這種配體特異性T細胞的TCRs可被克隆并在活化的T細胞中表達為轉基因TCR，使得轉基因T細胞獲得確定的特異性并且不具有攻擊正常宿主組織的能力。

因此，有必要不斷開發(fā)新的方法來開發(fā)抗體和T細胞受體。

發(fā)明概述

一方面，本公開涉及鑒定與抗原結合的靈長類動物抗體的方法。在一些實施方式中，該方法可以包括以下步驟：a)從已經(jīng)被抗原免疫的靈長類動物中獲得抗體生成B細胞群； b)從抗體生成B細胞群中獲得(i)多個抗體重鏈序列和(ii)多個抗體輕鏈序列；c)將所述獲得的多個抗體重鏈序列分成至少一個重鏈組，其中所述重鏈組中的所述抗體重鏈序列在譜系上相關；d)將所獲得的多個抗體輕鏈序列分成至少一個輕鏈組，其中所述輕鏈組中的所述抗體輕鏈序列在譜系上相關；e)選擇所述重鏈組和所述輕鏈組；f)將來自所述重鏈組的重鏈序列與來自所述輕鏈組的輕鏈序列配對；和g)測試包含配對重鏈和輕鏈序列的候選抗體與抗原結合的情況。

在某些實施方式中，重鏈組中所述抗體重鏈序列的CDR3區(qū)含有不超過5個相對于彼此的氨基酸差異，并且輕鏈組中所述抗體輕鏈序列的CDR3區(qū)含有不超過5個相對于彼此的氨基酸差異。

在某些實施方式中，所述抗原是人抗原。

在某些實施方式中，所述抗體重鏈序列是抗體重鏈可變區(qū)序列，所述抗體輕鏈序列是抗體輕鏈可變區(qū)序列。

在某些實施方式中，所述靈長類動物是舊大陸猴、猩猩、大猩猩或黑猩猩。在某些實施方式中，所述靈長類動物是食蟹獼猴，恒河猴或豚尾獼猴。

在某些實施方式中，重鏈組中所述抗體重鏈序列的CDR3區(qū)含有0、1或2個相對于彼此的氨基酸差異，并且輕鏈組中所述抗體輕鏈序列的CDR3區(qū)含有0、1或2個相對于彼此的氨基酸差異。

在某些實施方式中，步驟b)通過測序編碼來自單個B細胞或其培養(yǎng)物的重鏈和輕鏈序列的cDNAs來完成。

在某些實施方式中，步驟b)通過測序編碼由多個B細胞制備的重鏈和輕鏈序列的cDNAs來完成。