[發明專利]鑒定靈長類抗體的方法

有效

• 申請號: 201710312074.2
• 申請日: 2017-05-05
• 公開（公告）號: CN107435065B
• 公開（公告）日: 2021-06-25
• 發明（設計）人: 余國良
• 申請（專利權）人: 江蘇荃信生物醫藥有限公司
• 主分類號: C12Q1/6869
• 分類號: C12Q1/6869
• 代理公司: 北京彩和律師事務所 11688
• 代理人: 閆桑田

1.一種方法，包括以下步驟：

a)從被抗原免疫的非人靈長類動物中獲得合并的抗體生成B細胞群；

b)對由合并的抗體生成B細胞群制備的cDNA進行測序，以獲得：

(i)多個抗體重鏈可變區序列和

(ii)多個抗體輕鏈可變區序列，

其中每個抗體重鏈可變區序列包含H1CDR，H2CDR和H3CDR，其中抗體輕鏈可變區序列包含L1CDR，L2CDR和L3CDR；

c)將所述獲得的多個抗體重鏈可變區序列分成至少n個重鏈組(n＝5)，其中每個重鏈組中所述抗體重鏈可變區序列的H3CDR含有0、1或2個相對于彼此的氨基酸差異；

d)將所述獲得的多個抗體輕鏈可變區序列分成至少n個輕鏈組，其中每個輕鏈組中所述抗體輕鏈可變區序列的L3CDR s含有0、1或2個相對于彼此的氨基酸差異；

e)根據每個重鏈組中抗體重鏈可變區序列的數目對n個重鏈組進行排序，其中第i個重鏈組中抗體重鏈可變區序列的數目不小于第(i+1)個重鏈組(1＝in)中的重鏈可變區序列的數目；

f)根據每個輕鏈組中抗體輕鏈可變區序列的數目對n個輕鏈組進行排序，其中第i個輕鏈組中抗體輕鏈可變區序列的數目不小于第(i+1)個輕鏈組(1＝in)中的輕鏈可變區序列的數目；

g)將第i個重鏈組與第i個輕鏈組配對；

h)將第i個重鏈組的一個重鏈可變區序列和第i個輕鏈組的一個輕鏈可變區序列配對；并且

i)測試包含配對重鏈和輕鏈序列的候選抗體與抗原結合的情況。

2.根據權利要求1所述的方法，其中所述抗原是人抗原。

3.根據權利要求1所述的方法，其中所述非人靈長類動物是舊大陸猴、猩猩、大猩猩或黑猩猩。

4.根據權利要求1所述的方法，其中所述非人靈長類動物是食蟹獼猴，恒河猴或豚尾獼猴。

5.根據權利要求1所述的方法，其中所述合并的抗體生成B細胞群通過與抗原結合來富集。

6.根據權利要求1所述的方法，其中所述每個重鏈組和輕鏈組包含至少2個成員。

7.根據權利要求1所述的方法，其中所述步驟i)包括在阻斷測定、中和測定、激動劑測定或拮抗劑測定中測試候選抗體。

8.根據權利要求1所述的方法，其中所述步驟i)包括在酶聯免疫吸附測定中測試候選抗體。

9.根據權利要求1所述的方法，其中所述多個抗體重鏈可變區序列包含至少100個不同的抗體重鏈可變區序列，并且所述多個抗體輕鏈可變區序列包含至少100個不同的抗體輕鏈可變區序列。

10.根據權利要求1所述的方法，其中所述合并的抗體生成B細胞群獲取自骨髓、脾臟、淋巴結或外周血。

11.根據權利要求1所述的方法，還包括：

j)將所述重鏈可變區序列與人重鏈可變區序列比對，其中所述人重鏈可變區序列的框架與所述重鏈可變區序列的框架至少90％相同；

k)將所述輕鏈可變區序列與人輕鏈可變區序列比對，其中所述人輕鏈可變區序列的框架與所述輕鏈可變區序列的框架至少90％相同；

l)用所述人重鏈或人輕鏈可變區序列的相應氨基酸取代重鏈或輕鏈可變區序列中的至少一個氨基酸殘基，從而產生人源化抗體。

12.根據權利要求6所述的方法，還包括：

m)將第i個重鏈組的第二個重鏈可變區序列和第i個輕鏈組的第二個輕鏈可變區序列配對；并且

n)測試包含所述第二個重鏈和輕鏈可變區序列的第二個抗體與抗原結合的情況。