[發明專利]一種消除組培苗黃化的核桃組培快繁方法

有效

• 申請號: 201710311958.6
• 申請日: 2017-05-05
• 公開（公告）號: CN107006371B
• 公開（公告）日: 2019-03-01
• 發明（設計）人: 陳曉明;韋璐陽;李魁鵬;蔡玲;陳代喜;梁文匯;何振革;程琳;董利軍;賀佳君;鐘耀才
• 申請（專利權）人: 廣西壯族自治區林業科學研究院
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 廣西南寧匯博專利代理有限公司 45114
• 代理人: 盧穎

本發明公開了一種消除組培苗黃化的核桃組培快繁方法，包括繁殖材料選擇、外植體處理、初始芽誘導和增殖培養工序；采集當年生長健壯且無病蟲害的核桃嫩枝梢作為繁殖材料，對枝條進行修剪成莖段作為外植體，對外植體滅菌消毒處理后接種于初始芽誘導培養基中誘導初始芽發生，再將初始芽接種于增殖培養基中后得到無黃化現象的組培繼代芽。本發明在獲得無菌苗的的基礎上探索核桃組培快繁育苗過程中繼代培養時出現失綠黃化，嚴重影響了核桃組培苗的正常分化和生長，從而導致增殖系數降低的問題提出解決方法，消除核桃組培苗黃化現象，能正常分化和生長，提高繁殖系數，穩定遺傳性狀，從而使核桃組培苗能達到工廠化育苗的標準。

技術領域

本發明屬于植物組織培養技術領域，涉及一種消除組培苗黃化的核桃組培快繁方法。

背景技術

核桃(Juglans regia L.)古稱胡桃，屬胡桃科，胡桃屬，原產于歐洲東南部及亞洲西部，我國是核桃原產地之一。由于核桃是重要的堅果和木本油料樹種，具有很高的經濟價值，位居世界四大干果（核桃、扁桃、腰果、榛子）之首，以其很高的經濟、生態及社會效益在世界各地廣泛栽培。核桃在長期栽培和人為選擇過程中，形成了很多的高產、優質及抗病性良好的優良核桃品種，為了能保持這些品種的優良性狀，核桃的后代繁殖主要是采用嫁接和扦插的無性繁殖手段，但采用嫁接繁殖，存在繁殖系數低，速度慢，成活率不穩定，受穗條數量限制等不利因素；采用扦插繁殖方法，由于核桃體內存在有大量單寧抑制物質，扦插不易生根，這樣就導致核桃新的優良品種的迅速擴大受到限制。植物組培快繁方法也是當前苗木無性繁殖的主要方法之一，其特點是可使再生植株保持母體遺傳穩定性的同時，加快繁殖速度，一年內幾顆無菌小芽可以繁育百萬株以上的苗木，生產周期大大縮短，可以在較短時間內培育大量優質種苗，并且能建立規模化生產。由于植物組培技術的優越性，中外學者從20世紀60年代末開始對核桃進行組織快繁技術方面的研究并取得了一定的進展，但核桃組培繼代培養中的一些關鍵技術多年都未能得到很好解決，如核桃在繼代培養時極易出現失綠黃化，黃化率高達95%以上，嚴重影響了核桃組培苗的正常分化和生長，從而導致增殖系數大大降低，使得核桃組培苗工廠化育苗一直難以實現。

發明內容

本發明提出了一種克服現有技術中核桃組培快繁育苗過程中繼代培養時出現失綠黃化，嚴重影響了核桃組培苗的正常分化和生長，從而導致增殖系數降低的不足，提出了一種能夠消除核桃組培苗黃化現象，能正常分化和生長，提高繁殖系數，穩定遺傳性狀的消除組培苗黃化的核桃組培快繁方法。

為了實現上述目的，本發明的技術方案如下：

一種消除組培苗黃化的核桃組培快繁方法，包括繁殖材料選擇、外植體處理、初始芽誘導和增殖培養工序；采集當年生長健壯且無病蟲害的核桃嫩枝梢作為繁殖材料，對枝條進行修剪成莖段作為外植體，對外植體滅菌消毒處理后接種于初始芽誘導培養基中誘導初始芽發生，再將初始芽接種于增殖培養基中后得到無黃化現象的組培繼代芽；主要操作步驟如下：

（1）繁殖材料選擇：選擇通過國家級或省級良種審定的核桃良種無性系、樹齡5～8年生的為采穗母樹；在采穗母樹樹冠外圍的上方采集當年生長健壯且無病蟲害的核桃嫩枝梢，作為核桃組培的優良繁殖材料；

（2）外植體處理：將采集到的核桃嫩枝梢剪成只保留頂芽或2～3cm長帶腋芽的莖段作為外植體，用體積濃度75％乙醇溶液對外植體浸泡滅菌30 s，蒸餾水沖洗2次后將外植體置于超凈臺，再用體積濃度0.1％HgCl₂溶液以振蕩的方式對外植體進行滅菌處理 8～10min，最后用無菌水沖洗5次；

（3）初始芽誘導：將步驟（2）處理得到的外植體接種于誘導培養基中，并置于溫度25±2℃，光照強度2000～3500LX，光照10～14 h/d的環境中誘導初始芽發生；

（4）增殖培養：將步驟（3）獲得的初始芽接種于增殖培養基, 并置于溫度25±2℃，光照強度2000～3500LX，光照10～14 h/d的環境中進行增殖培養，得到無黃化現象的組培繼代芽。