[發明專利]一種消除組培苗黃化的核桃組培快繁方法

有效

• 申請號: 201710311958.6
• 申請日: 2017-05-05
• 公開（公告）號: CN107006371B
• 公開（公告）日: 2019-03-01
• 發明（設計）人: 陳曉明;韋璐陽;李魁鵬;蔡玲;陳代喜;梁文匯;何振革;程琳;董利軍;賀佳君;鐘耀才
• 申請（專利權）人: 廣西壯族自治區林業科學研究院
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 廣西南寧匯博專利代理有限公司 45114
• 代理人: 盧穎

1.一種消除組培苗黃化的核桃組培快繁方法，其特征在于：包括繁殖材料選擇、外植體處理、初始芽誘導和增殖培養工序；采集當年生長健壯且無病蟲害的核桃嫩枝梢作為繁殖材料，對枝條進行修剪成莖段作為外植體，對外植體滅菌消毒處理后接種于初始芽誘導培養基中誘導初始芽發生，再將初始芽接種于增殖培養基中后得到無黃化現象的組培繼代芽；主要操作步驟如下：

(1)繁殖材料選擇：選擇通過國家級或省級良種審定的核桃良種無性系、樹齡5～8年生的為采穗母樹；在采穗母樹樹冠外圍的上方采集當年生長健壯且無病蟲害的核桃嫩枝梢，作為核桃組培的優良繁殖材料；

(2)外植體處理：將采集到的核桃嫩枝梢剪成只保留頂芽或2～3cm長帶腋芽的莖段作為外植體，用體積濃度75％乙醇溶液對外植體浸泡滅菌30s，蒸餾水沖洗2次后將外植體置于超凈臺，再用體積濃度0.1％HgCl₂溶液以振蕩的方式對外植體進行滅菌處理8～10min，最后用無菌水沖洗5次；

(3)初始芽誘導：將步驟(2)處理得到的外植體接種于誘導培養基中，并置于溫度25±2℃，光照強度2000～3500LX，光照10～14h/d的環境中誘導初始芽發生；

(4)增殖培養：將步驟(3)獲得的初始芽接種于增殖培養基,并置于溫度25±2℃，光照強度2000～3500LX，光照10～14h/d的環境中進行增殖培養，得到無黃化現象的組培繼代芽；

步驟(3)所述的誘導培養基的原料組分和質量含量為：改良MS+6-BA 0.5mg·L^-1+蔗糖30000mg·L^-1+水解乳蛋白300mg·L^-1+表油菜素內酯0.2mg·L^-1+瓊脂3000mg·L^-1；

步驟(4)所述的增殖培養基的原料組分和質量含量為：改良MS+6-BA 1.0～2.0mg·L^-1+蔗糖30000mg·L^-1+水解乳蛋白300～500mg·L^-1+表油菜素內酯0.3～0.5mg·L^-1+瓊脂3000mg·L^-1；

步驟(3)和(4)所述的改良MS培養基的組成為：KNO₃ 1600mg·L^-1；NH₄NO₃ 1200mg·L^-1；CaCl₂ 350mg·L^-1；MgSO₄.7H₂O 370mg·L^-1；Ca(NO₃)₂.4H₂O 100mg·L^-1；KH₂PO₃ 270mg·L^-1；MnSO₄.4H₂O 22.3mg·L^-1；ZnSO₄.7H₂O 10.6mg·L^-1；CuSO₄.5H₂O 0.025mg·L^-1；H₃BO₃8.2mg·L^-1；Na₂MoO₄.2H₂O 0.25mg·L^-1；KI 0.83mg·L^-1；CoCl₂.6H₂O 0.025mg·L^-1；Na₂·EDTA 37.3mg·L^-1；FeSO₄.7H₂O 27.8mg·L^-1；維生素B1 0.4mg·L^-1；維生素B6 0.5mg·L^-1；煙酸2.0mg·L^-1；甘氨酸1.0mg·L^-1；肌醇120mg·L^-1。