[發明專利]一種基于miR-221的肝損傷靶向間充質干細胞及其制備方法與應用

有效

• 申請號: 201710309770.8
• 申請日: 2017-05-04
• 公開（公告）號: CN107164331B
• 公開（公告）日: 2020-05-22
• 發明（設計）人: 張煥相;黃萍;劉書婷;賀麗虹
• 申請（專利權）人: 蘇州大學
• 主分類號: C12N5/10
• 分類號: C12N5/10;A61K35/28;A61P1/16
• 代理公司: 蘇州創元專利商標事務所有限公司 32103
• 代理人: 陶海鋒;孫周強

本發明公開了一種基于miR?221的肝損傷靶向間充質干細胞及其制備方法與應用，由間充質干細胞轉染或感染核酸制備得到，其高表達miR?221，具體制備為將人間充質干細胞轉染miR?221模擬物（mimic或agomir）或感染表達miR?221的病毒制備得到；為了進一步提高MSCs靶向肝損傷部位的效率，改善肝功能和組織結構恢復的效果，可以利用堿性成纖維細胞生長因子處理間充質干細胞。本發明的肝損傷靶向間充質干細胞對肝損傷有高效的靶向性，有助于減輕肝纖維化、改善肝功能，穩定性高，便于保存和運輸，使用安全，可為肝病患者帶來福音。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及一種基于miR-221的肝損傷靶向間充質干細胞及其制備方法與應用。

背景技術

各種原因如病毒、寄生蟲感染、乙醇、藥物或化學毒害以及免疫功能紊亂等均能引起急、慢性肝損傷，長期或反復作用還可能導致肝硬化甚至發展到肝衰竭、終末期肝病。肝病一旦發展到終末期，常規治療僅能緩解患者的臨床癥狀，且療效不佳。間充質干細胞（mesenchymal stem cells，MSCs）是一種中胚層來源的具有多分化潛能的成體干細胞，其主要存在于結締組織和器官間質中，以骨髓組織中的含量最為豐富。間充質干細胞具有干細胞所特有的無限增殖及自我更新的能力，在體外傳代培養及凍存復蘇后仍能夠保持其“干性”；具有多分化潛能，在合適的體內外環境下，可分化成為成骨細胞、軟骨細胞、脂肪細胞等多種類型細胞；表面抗原不明顯，具有低免疫原性，且具有免疫調節功能，故被作為理想的種子細胞廣泛應用于衰老和病變引起的組織器官損傷修復。國內外已有學者將不同來源的MSCs應用于肝病動物模型、臨床前及臨床肝病的治療，取得了一些有意義的發現和可喜的治療效果。研究顯示，MSCs在體外可被誘導分化成具有肝細胞的形態、表型和功能特征的細胞，此類細胞能表達白蛋白(albumin)、甲胎蛋白(alpha-fetal protein, AFP)、細胞角蛋白(cytokeratins, CK) CK8、CK18等肝系細胞和膽管細胞的特異性標志物。

但MSCs移植治療肝病僅處于理論階段，在臨床應用中仍存在許多亟待解決的問題，特別是療效并不穩定，個體差異較大；更有研究顯示MSCs移植對肝功能、組織結構的修復無作用，甚至有負面的影響。究其原因，一方面，移植的MSCs只有定植/歸巢到病變部位，才能有效地發揮治療和修復作用，但體內研究發現只有少量的移植細胞富集到了損傷或病變部位；其次，移植的MSCs定植到肝損傷部位，有的分化為肝巨噬細胞(kupffer cell)，而肝巨噬細胞對于肝星狀細胞(hepatic stellate cell)的活化、增殖、遷移、存活等有促進作用，不利于炎癥和纖維化的修復；有的召集肌成纖維細胞(myofibroblast)而促進其分泌膠原產生纖維化；有的可以轉分化為功能性的肝星狀細胞和肌成纖維細胞，更多地分泌膠原等細胞外基質，從而進一步增強了肝臟的纖維化損傷（參見：Zhao Q, Ren H, Zhu D,Han Z. Stem/progenitor cells in liver injury repair and regeneration. BiolCell, 2009, 101(10): 557-571；Ji J, He BP, Dheen ST, Tay SS. Interactions ofchemokines and chemokine receptors mediate the migration of mesenchymal stemcells to the impaired site in the brain after hypoglossal nerve injury. StemCells, 2004, 22(3): 415-427）。