[發(fā)明專利]一種基于miR-221的肝損傷靶向間充質(zhì)干細(xì)胞及其制備方法與應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710309770.8
• 申請(qǐng)日: 2017-05-04
• 公開（公告）號(hào): CN107164331B
• 公開（公告）日: 2020-05-22
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張煥相;黃萍;劉書婷;賀麗虹
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 蘇州大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N5/10
• 分類號(hào): C12N5/10;A61K35/28;A61P1/16
• 代理公司: 蘇州創(chuàng)元專利商標(biāo)事務(wù)所有限公司 32103
• 代理人: 陶海鋒;孫周強(qiáng)

1.肝損傷靶向間充質(zhì)干細(xì)胞在制備治療肝損傷的靶向藥物中的應(yīng)用，其特征在于：所述肝損傷靶向間充質(zhì)干細(xì)胞由間充質(zhì)干細(xì)胞轉(zhuǎn)染或感染核酸制備得到；所述核酸為miR-221；所述肝損傷靶向間充質(zhì)干細(xì)胞由間充質(zhì)干細(xì)胞轉(zhuǎn)染或感染核酸后，再經(jīng)過堿性成纖維細(xì)胞生長因子處理得到；堿性成纖維細(xì)胞生長因子的濃度為10～20 ng/mL。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于：所述肝損傷靶向間充質(zhì)干細(xì)胞的制備方法為，通過轉(zhuǎn)染試劑將miR-221轉(zhuǎn)入間充質(zhì)干細(xì)胞，然后再經(jīng)過堿性成纖維細(xì)胞生長因子處理得到肝損傷靶向間充質(zhì)干細(xì)胞；或者通過病毒載體將miR-221轉(zhuǎn)入間充質(zhì)干細(xì)胞，然后再經(jīng)過堿性成纖維細(xì)胞生長因子處理得到肝損傷靶向間充質(zhì)干細(xì)胞。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于：所述轉(zhuǎn)染試劑為脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑；所述病毒為腺相關(guān)病毒、腺病毒或者逆轉(zhuǎn)錄病毒。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于：通過轉(zhuǎn)染試劑將miR-221轉(zhuǎn)入間充質(zhì)干細(xì)胞得到肝損傷靶向間充質(zhì)干細(xì)胞的步驟為將miR-221模擬物與轉(zhuǎn)染試劑分別用L-DMEM稀釋后混合，室溫靜置得到轉(zhuǎn)染混合液；然后將培養(yǎng)至第4～8代、匯合度達(dá)80%～90%的間充質(zhì)干細(xì)胞經(jīng)PBS洗滌，再加入轉(zhuǎn)染混合液；然后于37℃培養(yǎng)箱中孵育5～6 h，接著把轉(zhuǎn)染混合液更換為完全培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)36～48 h即可得到肝損傷靶向間充質(zhì)干細(xì)胞；

通過病毒載體將miR-221轉(zhuǎn)入間充質(zhì)干細(xì)胞得到肝損傷靶向間充質(zhì)干細(xì)胞的步驟為將培養(yǎng)至第4～8代、匯合度達(dá)80%～90%的間充質(zhì)干細(xì)胞經(jīng)PBS洗滌，然后加入表達(dá)miR-221的病毒上清液，37℃感染85～95 min后，將病毒上清夜更換為完全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)24～48 h即可得到肝損傷靶向間充質(zhì)干細(xì)胞。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于：將轉(zhuǎn)入miR-221的間充質(zhì)干細(xì)胞置入帶有堿性成纖維細(xì)胞生長因子的培養(yǎng)基中，處理0.5～24 h得到肝損傷靶向間充質(zhì)干細(xì)胞；所述帶有堿性成纖維細(xì)胞生長因子的培養(yǎng)基中，堿性成纖維細(xì)胞生長因子的濃度為10～20 ng/mL。

6.一種治療肝損傷的靶向藥物的制備方法，其特征在于：將肝損傷靶向間充質(zhì)干細(xì)胞與藥物輔料混合，制備治療肝損傷的靶向藥物，所述肝損傷靶向間充質(zhì)干細(xì)胞由間充質(zhì)干細(xì)胞轉(zhuǎn)染或感染核酸制備得到；所述核酸為miR-221；所述肝損傷靶向間充質(zhì)干細(xì)胞由間充質(zhì)干細(xì)胞轉(zhuǎn)染或感染核酸后，再經(jīng)過堿性成纖維細(xì)胞生長因子處理得到；堿性成纖維細(xì)胞生長因子的濃度為10～20 ng/mL。