[發明專利]一種胸腺肽α1的制備方法

有效

• 申請號: 201710309702.1
• 申請日: 2017-05-04
• 公開（公告）號: CN107417786B
• 公開（公告）日: 2021-03-09
• 發明（設計）人: 王錫平;盧然
• 申請（專利權）人: 蘇州強耀生物科技有限公司
• 主分類號: C07K14/575
• 分類號: C07K14/575;C07K1/06;C07K1/08
• 代理公司: 北京科億知識產權代理事務所(普通合伙) 11350
• 代理人: 湯東鳳

本發明提供一種胸腺肽α1的制備方法，在合理位點分3片段合成多肽，分段避開了β折疊結構形成的主要位點，提高了鍵合度，減少副產物形成的機會，大大提高了胸腺肽α1的產率。解決胸腺肽α1合成工藝中存在的一些問題，提供一種收率更高、成本更低、有利于實現產業化的胸腺肽α1的固相合成。

技術領域

本發明涉及胸腺肽α1的技術領域，尤其涉及胸腺肽α1的合成方法。

背景技術

胸腺肽是胸腺產生的一種蛋白質和多肽激素，是一種生物反應調節因子，能促進淋巴細胞成熟，調節和增強人體免疫機制，在臨床上具有抗衰老、抗病毒復制、抗腫瘤細胞分化的作用。胸腺肽制劑在我國臨床應用已有20多年的歷史，主要成分為健康小牛等動物的胸腺組織提取物。但由于各種制劑的生產工藝，標準不同，產品質量及臨床療效也有較大的差異。

胸腺五肽(TP-5)由精氨酸、賴氨酸、天門冬氨酸、纈氨酸、酪氨酸五種氨基酸組成，是胸腺分泌物的一種胸腺生成素Ⅱ的有效部分。胸腺生成素Ⅱ是從胸腺激素中分離出來的單一多肽化合物，由49個氨基酸組成，而其中由5個氨基酸組成的肽鏈片段，卻有著與胸腺生成素II相同的全部生理功能，所以就把這個五肽片段稱為胸腺五肽。目前我國的胸腺五肽制劑是以氨基酸為原料，通過高科技手段人工合成的化合物，結構明確，純度高。

胸腺肽α1(Tα1)是胸腺肽中的高端產品，序列為N-乙酰化-L-絲氨酰-L-天冬氨酰-L-丙氨酰-L-丙氨酰-L-纈氨酰-L-天冬氨酰-L-蘇氨酰-L-絲氨酰-L-絲氨酰-L-谷氨酰-L-異亮氨酰-L-蘇氨酰-L-蘇氨酰-L-賴氨酰-L-天冬氨酰-L-亮氨酰-L-賴氨酰-L-谷氨酰-L-賴氨酰-L-賴氨酰-L-谷氨酰-L-纈氨酰-L-纈氨酰-L-谷氨酰-L-谷氨酰-L-丙氨酰-L-谷氨酰-L-天冬酰胺。該藥物是由胸腺素組分5(TF-5)中分離純化分離出的一種小分子生物活性多肽，由28種氨基酸排列而成，分子量3108.37，其含量約占TF-5的0.6％，具有較高的免疫增強活性。胸腺肽α1與胸腺生成素Ⅱ是目前人類了解得最清楚的兩種胸腺激素組分，因此，市面上的胸腺肽α1與胸腺五肽一樣，都具有明確的結構，純度高達99％以上。

總的說來，胸腺肽、胸腺五肽、胸腺肽α1都是胸腺激素類的免疫調節劑，具有調節T淋巴細胞發育、分化和成熟的作用，同時能修復受損的T淋巴細胞，在人體免疫系統中發揮著重要作用。胸腺肽是動物胸腺提取物，含有各種胸腺激素，而胸腺五肽和胸腺肽α1是人體胸腺激素中重要的活性組分，由人工合成，有效成分確切，作用機制清楚，無需皮試。而胸腺肽α1與胸腺肽各單一組分間，或與胸腺肽整體比較，生物活性均為最高，其活性相當于胸腺肽的2000倍，相當于胸腺五肽的10到1000倍，所以一個高產率、低成本的合成方式尤為重要。

目前市場上采用的胸腺肽α1生產方法：基因工程方法和化學固相合成方法。基因工程方法利用生物工程技術,將多個胸腺素基因進行重組,在宿主細胞中表達該重組基因而獲得高表達的多個胸腺素融合體；利用化學技術將該融合體裂解和修飾,最終形成胸腺肽α1單體。基因工程方法的缺點是表達量比較低，而且所需費用較高，很難實現產業化。

化學固相合成方法采用傳統的多肽化學固相合成法以王樹脂為載體，用對稱酸酐法和DCC-HOBt縮合法合成胸腺肽α1。雖然能夠得到純度及活性相對較高的胸腺肽α1產品，但是因為重復縮合不停的產生副產物，及合成中產生的β折疊結構，最終制備得到的純品收率極低，難以工業化放大生產。

有鑒于上述的缺陷，本設計人，積極加以研究創新，以期創設一種一種胸腺肽α1的制備方法，使其更具有產業上的利用價值。

發明內容

為解決上述技術問題，本發明提供一種片段固液相的胸腺肽α1的制備方法，優化了原化學固相合成中的不足之處，增加了片段合成法以及液相合成方法。

本發明的胸腺肽α1的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)分別制備氨基酸序列如下的多肽片：