[發明專利]一種胸腺肽α1的制備方法

有效

• 申請號: 201710309702.1
• 申請日: 2017-05-04
• 公開（公告）號: CN107417786B
• 公開（公告）日: 2021-03-09
• 發明（設計）人: 王錫平;盧然
• 申請（專利權）人: 蘇州強耀生物科技有限公司
• 主分類號: C07K14/575
• 分類號: C07K14/575;C07K1/06;C07K1/08
• 代理公司: 北京科億知識產權代理事務所(普通合伙) 11350
• 代理人: 湯東鳳

1.一種胸腺肽α1的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)分別制備氨基酸序列如下的多肽片段：

Fmoc-Val-Glu(Otbu)-Glu(Otbu)-Ala-Glu(Otbu)-Asn(Trt)-Linker2-ChlorotritylChloride resin和Fmoc-Asp(Otbu)-Leu-Lys(Boc)-Glu-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Glu(Otbu)-Val-OH；

(2)將步驟(1)中得到的多肽片段

Fmoc-Asp(Otbu)-Leu-Lys(Boc)-Glu-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Glu(Otbu)-Val-OH與Fmoc-Val-Glu(Otbu)-Glu(Otbu)-Ala-Glu(Otbu)-Asn(Trt)-Linker2-Chlorotrityl Chlorideresin的氨基端連接，并脫除氨基端的Fmoc保護基，然后用第一縮合劑連接15-19號位點氨基酸，得到氨基酸序列如下的多肽片段：

Fmoc-Glu(Otbu)-Ile-Thr(Tbu)-Thr(Tbu)-Lys(Boc)-Asp(Otbu)-Leu-Lys(Boc)-Glu-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Glu(Otbu)-Val-Val-Glu(Otbu)-Glu(Otbu)-Ala-Glu(Otbu)-Asn(Trt)-Linker2-ChlorotritylChloride resin；所述第一縮合劑為HATU；

(3)脫除步驟(2)中得到的多肽片段中氨基端的Fmoc保護基，并用第二縮合劑連接20-24號位點氨基酸，得到氨基酸序列如下的多肽片段：

Fmoc-Val-Asp(Otbu)-Thr(Tbu)-Ser(Trt)-Ser(Trt)-Glu(Otbu)-Ile-Thr(Tbu)-Thr(Tbu)-Lys(Boc)-Asp(Otbu)-Leu-Lys(Boc)-Glu-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Glu(Otbu)-Val-Val-Glu(Otbu)-Glu(Otbu)-Ala-Glu(Otbu)-Asn(Trt)-Linker2-Chlorotrityl Chlorideresin；所述第二縮合劑為HOBT；

(4)制備氨基酸序列如下的多肽片段：

Fmoc-Ser(Trt)-Asp(Otbu)-Ala-Ala-OH；

(5)將步驟(3)中得到的多肽片段的氨基端與步驟(4)中得到的多肽片段連接，得到氨

基酸序列如下的多肽片段：

Fmoc-Ser(Trt)-Asp(Otbu)-Ala-Ala-Val-Asp(Otbu)-Thr(Tbu)-Ser(Trt)-Ser(Trt)-Glu(Otbu)-Ile-Thr(Tbu)-Thr(Tbu)-Lys(Boc)-Asp(Otbu)-Leu-Lys(Boc)-Glu-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Glu(Otbu)-Val-Val-Glu(Otbu)-Glu(Otbu)-Ala-Glu(Otbu)-Asn(Trt)-Linker2-Chlorotrityl Chloride resin；

(6)脫除步驟(5)中得到的多肽片段的氨基端的Fmoc保護基，并將裸露的氨基乙酰化，

得到氨基酸序列如下的樹脂肽：

Ac-Ser(Trt)-Asp(Otbu)-Ala-Ala-Val-Asp(Otbu)-Thr(Tbu)-Ser(Trt)-Ser(Trt)-Glu(Otbu)-Ile-Thr(Tbu)-Thr(Tbu)-Lys(Boc)-Asp(Otbu)-Leu-Lys(Boc)-Glu-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Glu(Otbu)-Val-Val-Glu(Otbu)-Glu(Otbu)-Ala-Glu(Otbu)-Asn(Trt)-Linker2-Chlorotrityl Chloride resin；

(7)裂解步驟(6)中得到的樹脂肽，并經純化得到氨基酸序列如下的胸腺肽α1：

Ac-Ser-Asp-Ala-Ala-Val-Asp-Thr-Ser-Ser-Glu-Ile-Thr-Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-

Lys-Lys-Glu-Val-Val-Glu-Glu-Ala-Glu-Asn-OH；

步驟(1)中，所述多肽片段Fmoc-Val-

Glu(Otbu)-Glu(Otbu)-Ala-Glu(Otbu)-Asn(Trt)-Linker2-Chlorotrityl Chloride

resin的制備包括以下步驟：

(1-1)將2-Chlorotrityl Chloride resin樹脂與活化后的氨基酸Fmoc-Asn(Trt)-OH反應，得到連接有氨基酸的樹脂；

(1-2)脫除步驟(1-1)中得到的連接有氨基酸的樹脂Fmoc保護基；

(1-3)重復步驟(1-1)和(1-2)，通過重復脫除Fmoc保護基和依次投入活化后的氨基酸進行反應，其中投入的氨基酸依次為：

Fmoc-Glu(Otbu)-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Glu(Otbu)-OH、Fmoc-Glu(Otbu)-OH、Fmoc-Val-OH，得到多肽片段Fmoc-Val-Glu (Otbu) -Glu (Otbu) -Ala-Glu (Otbu) -Asn (Trt)-Linker2-Chlorotrityl Chloride resin。