[發(fā)明專(zhuān)利]一種通過(guò)羧甲基化得到的新型抗腫瘤化合物

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710306160.2
• 申請(qǐng)日: 2017-05-03
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN108117608A
• 公開(kāi)（公告）日: 2018-06-05
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳奕;聶少平;謝明勇
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 南昌大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): C08B37/00
• 分類(lèi)號(hào): C08B37/00;A61P37/04;A61P35/00
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

本發(fā)明提供了一種新型抗腫瘤化合物，以黑靈芝為原料，經(jīng)過(guò)提取、精制分離、羧甲基化得到產(chǎn)物CM?PSG，能夠刺激巨噬細(xì)胞，明顯增強(qiáng)巨噬細(xì)胞的吞噬能力和細(xì)胞上清中TNF?α的蛋白表達(dá)量，使機(jī)體的免疫功能加強(qiáng)，進(jìn)而增強(qiáng)抵抗疾病的能力，能夠中和更多的亞油酸自由基和其他在體系中形成的自由基，減緩β?胡蘿卜素的褪色，可用于抗腫瘤。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種新型抗腫瘤化合物，尤其涉及一種通過(guò)羧甲基化得到的新型抗腫瘤化合物。

背景技術(shù)

近年來(lái)隨著人們生活方式的改變和醫(yī)療技術(shù)的提高，腫瘤檢出人數(shù)也呈增高趨勢(shì)，腫瘤已成為對(duì)人類(lèi)健康造成嚴(yán)重威脅的重要疾病之一，由于對(duì)患者機(jī)體具有較高的損害性和較高的病死率，抗腫瘤藥物的應(yīng)用和研究一直是人們所關(guān)注的焦點(diǎn)，新的治療理論和新型藥物不斷被開(kāi)發(fā)和應(yīng)用。

科學(xué)家們合成了許多分子靶標(biāo)明確的抗腫瘤分子藥物，但是由于化學(xué)合成藥物的開(kāi)發(fā)周期長(zhǎng)以及研發(fā)費(fèi)用昂貴，且臨床毒副作用大，制約了藥物的進(jìn)一步研發(fā)和應(yīng)用。中草藥和植物藥等天然藥用材料中存在著廣泛的生物活性物質(zhì)，研究者可從中藥中尋找毒副作用小、藥理作用獨(dú)特的抗腫瘤藥物及抗腫瘤輔助藥物。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種新型抗腫瘤藥物，對(duì)免疫巨噬細(xì)胞則有明顯的激活作用，通過(guò)刺激機(jī)體的免疫功能來(lái)消滅腫瘤細(xì)胞，而不是通過(guò)細(xì)胞毒作用直接抗腫瘤。

本發(fā)明的技術(shù)方案如下：

一種通過(guò)羧甲基化得到的新型抗腫瘤化合物，制備方法為:

(1)取干燥黑靈芝藥材100g，加95％乙醇室溫浸泡提取48h，過(guò)濾，重復(fù)一次，藥渣于室溫下置通風(fēng)處晾干，然后將藥渣與蒸餾水按質(zhì)量體積(kg/L)比為1：20的比例混合，回流提取兩次，每次提取時(shí)間依次為2h，1h，合并提取液，離心分離，減壓濃縮；所得樣品加入適量的95％乙醇使溶液中使得乙醇的體積分?jǐn)?shù)為80％，然后進(jìn)行沉淀，4℃下靜置24h，離心過(guò)濾；沉淀物合并，依次以無(wú)水乙醇、無(wú)水乙醚、丙酮洗滌沉淀物，冷凍干燥得樣品；取得到的干燥樣品，以Sevag法除蛋白，即Sevag試劑(體積比氯仿∶正丁醇＝5∶1)和干燥樣品以質(zhì)量比1∶1混勻，靜置，除去下層蛋白質(zhì)變性層；將樣品濃縮，重復(fù)除蛋白操作10次；濃縮除蛋白樣品后用95％乙醇洗滌，再濃縮，凍干得粗提物樣品；將粗提物樣品使用透析袋透析3天，將袋內(nèi)樣品濃縮至小體積，冷凍干燥，得黑靈芝精提物；

(2)取上述得到的黑靈芝精提物500mg，加入蒸餾水配成濃度為3～5mg/mL的溶液，離心，上清液過(guò)凝膠柱層析，使用的層析系統(tǒng)是Purifier 100生物大分子純化系統(tǒng)，凝膠柱Hiload 26/60 Superdex-200 prep grade，上樣前將樣品和洗脫液過(guò)0.22μm微孔濾膜以保護(hù)分離柱，洗脫液為蒸餾水，流速為2mL/min，上樣體積為5mL，分部收集體積為8mL/管，紫外檢測(cè)器和示差折光檢測(cè)器檢測(cè)(RID-10A示差檢測(cè)器)在線(xiàn)監(jiān)測(cè)洗脫情況；取第6-14管合并，濃縮，冷凍干燥得到黑靈芝提取物PSG，為黃色或棕色的絮狀固體；

(3)CM-PSG的制備：300mgPSG樣品懸浮于5mL20％NaOH和12.5mL異丙醇的混合液中，于冰浴中攪拌反應(yīng)3h，然后再分別邊攪拌邊緩慢加入含不同比例氯乙酸的異丙醇混合溶液，于室溫下反應(yīng)3h，然后調(diào)至60℃繼續(xù)反應(yīng)1.5h。冷卻至室溫后，加入0.5mol/L的HCL調(diào)pH值到7，并用蒸餾水透析72小時(shí)，濃縮，濃縮液用95％乙醇沉淀，攪拌靜置后4℃，4000rpm離心30min，收集沉淀，用乙醇，丙酮依次洗滌，冷凍干燥得衍生物，記為CM-PSG。

本發(fā)明提供了一種新型抗腫瘤化合物，以黑靈芝為原料，經(jīng)過(guò)提取、精制分離、羧甲基化得到產(chǎn)物CM-PSG，能夠刺激巨噬細(xì)胞，明顯增強(qiáng)巨噬細(xì)胞的吞噬能力和細(xì)胞上清中TNF-α的蛋白表達(dá)量，使機(jī)體的免疫功能加強(qiáng)，進(jìn)而增強(qiáng)抵抗疾病的能力，能夠中和更多的亞油酸自由基和其他在體系中形成的自由基，減緩β-胡蘿卜素的褪色，可用于抗腫瘤。

附圖說(shuō)明