[發明專利]一種通過蛋白酶解得到的新型抗腫瘤化合物

在審

• 申請號: 201710303658.3
• 申請日: 2017-05-03
• 公開（公告）號: CN108129579A
• 公開（公告）日: 2018-06-08
• 發明（設計）人: 陳奕;聶少平;謝明勇
• 申請（專利權）人: 南昌大學
• 主分類號: C08B37/00
• 分類號: C08B37/00;A61K31/715;A61P35/00;A61P39/06
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明提供了一種新型抗腫瘤化合物，以黑靈芝為原料，經過提取、精制分離、蛋白酶解得到的產物，能夠刺激巨噬細胞，明顯增強巨噬細胞的吞噬能力和細胞上清中TNF?α的蛋白表達量，使機體的免疫功能加強，進而增強抵抗疾病的能力。對DPPH自由基的清除效果較好，可用于抗腫瘤。

技術領域

本發明涉及一種新型抗腫瘤化合物，尤其涉及一種通過蛋白酶解得到的新型抗腫瘤化合物。

背景技術

近年來隨著人們生活方式的改變和醫療技術的提高，腫瘤檢出人數也呈增高趨勢，腫瘤已成為對人類健康造成嚴重威脅的重要疾病之一，由于對患者機體具有較高的損害性和較高的病死率，抗腫瘤藥物的應用和研究一直是人們所關注的焦點，新的治療理論和新型藥物不斷被開發和應用。

科學家們合成了許多分子靶標明確的抗腫瘤分子藥物，但是由于化學合成藥物的開發周期長以及研發費用昂貴，且臨床毒副作用大，制約了藥物的進一步研發和應用。中草藥和植物藥等天然藥用材料中存在著廣泛的生物活性物質，研究者可從中藥中尋找毒副作用小、藥理作用獨特的抗腫瘤藥物及抗腫瘤輔助藥物。

發明內容

本發明的目的是提供一種新型抗腫瘤藥物，對免疫巨噬細胞則有明顯的激活作用，通過刺激機體的免疫功能來消滅腫瘤細胞，而不是通過細胞毒作用直接抗腫瘤。

本發明的技術方案如下：

一種通過蛋白酶解得到的新型抗腫瘤化合物，制備方法如下：

(1)取干燥黑靈芝藥材100g，加95％乙醇室溫浸泡提取48h，過濾，重復一次，藥渣于室溫下置通風處晾干，然后將藥渣與蒸餾水按質量體積(kg/L)比為1：20的比例混合，回流提取兩次，每次提取時間依次為2h，1h，合并提取液，離心分離，減壓濃縮；所得樣品加入適量的95％乙醇使溶液中使得乙醇的體積分數為80％，然后進行沉淀，4℃下靜置24h，離心過濾；沉淀物合并，依次以無水乙醇、無水乙醚、丙酮洗滌沉淀物，冷凍干燥得樣品；取得到的干燥樣品，以Sevag法除蛋白，即Sevag試劑(體積比氯仿∶正丁醇＝5∶1)和干燥樣品以質量比1∶1混勻，靜置，除去下層蛋白質變性層；將樣品濃縮，重復除蛋白操作10次；濃縮除蛋白樣品后用95％乙醇洗滌，再濃縮，凍干得粗提物樣品；將粗提物樣品使用透析袋透析3天，將袋內樣品濃縮至小體積，冷凍干燥，得黑靈芝精提物；

(2)取上述得到的黑靈芝精提物500mg，加入蒸餾水配成濃度為3～5mg/mL的溶液，離心，上清液過凝膠柱層析，使用的層析系統是Purifier 100生物大分子純化系統，凝膠柱Hiload 26/60Superdex-200prep grade，上樣前將樣品和洗脫液過0.22μm微孔濾膜以保護分離柱，洗脫液為蒸餾水，流速為2mL/min，上樣體積為5mL，分部收集體積為8mL/管，紫外檢測器和示差折光檢測器檢測(RID-10A示差檢測器)在線監測洗脫情況；取第6-14管合并，濃縮，冷凍干燥得到黑靈芝提取物PSG，為黃色或棕色的絮狀固體；

(3)用胃蛋白酶或胰蛋白酶對PSG進行水解，得到PSG-胃或PSG-胰。

所述胰蛋白酶、胃蛋白酶為生化試劑，Sigma公司生產。

本發明蛋白酶解得到的產物PSG-胃或PSG-胰，能夠刺激巨噬細胞，明顯增強巨噬細胞的吞噬能力和細胞上清中TNF-α的蛋白表達量，使機體的免疫功能加強，進而增強抵抗疾病的能力。對DPPH自由基的清除效果較好，可用于抗腫瘤。

附圖說明

圖1為PSG-胰5的高效凝膠滲透色譜圖。

圖2為PSG-胃5的高效凝膠滲透色譜圖。

圖3為PSG、PSG-胃2和PSG-胰5的紅外光譜圖。

圖4為PSG-胃3，PSG-胰3及PSG清除DPPH自由基的能力示意圖。

具體實施例