[發明專利]一種通過蛋白酶解得到的新型抗腫瘤化合物

在審

• 申請號: 201710303658.3
• 申請日: 2017-05-03
• 公開（公告）號: CN108129579A
• 公開（公告）日: 2018-06-08
• 發明（設計）人: 陳奕;聶少平;謝明勇
• 申請（專利權）人: 南昌大學
• 主分類號: C08B37/00
• 分類號: C08B37/00;A61K31/715;A61P35/00;A61P39/06
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種通過蛋白酶解得到的新型抗腫瘤化合物，其特征在于：制備方法如下：

(1)取干燥黑靈芝藥材100g，加95％乙醇室溫浸泡提取48h，過濾，重復一次，藥渣于室溫下置通風處晾干，然后將藥渣與蒸餾水按質量體積(kg/L)比為1：20的比例混合，回流提取兩次，每次提取時間依次為2h，1h，合并提取液，離心分離，減壓濃縮；所得樣品加入適量的95％乙醇使溶液中使得乙醇的體積分數為80％，然后進行沉淀，4℃下靜置24h，離心過濾；沉淀物合并，依次以無水乙醇、無水乙醚、丙酮洗滌沉淀物，冷凍干燥得樣品；取得到的干燥樣品，以Sevag法除蛋白，即Sevag試劑(體積比氯仿∶正丁醇＝5∶1)和干燥樣品以質量比1∶1混勻，靜置，除去下層蛋白質變性層；將樣品濃縮，重復除蛋白操作10次；濃縮除蛋白樣品后用95％乙醇洗滌，再濃縮，凍干得粗提物樣品；將粗提物樣品使用透析袋透析3天，將袋內樣品濃縮至小體積，冷凍干燥，得黑靈芝精提物；

(2)取上述得到的黑靈芝精提物500mg，加入蒸餾水配成濃度為3～5mg/mL的溶液，離心，上清液過凝膠柱層析，使用的層析系統是Purifier 100生物大分子純化系統，凝膠柱Hiload 26/60Superdex-200prep grade，上樣前將樣品和洗脫液過0.22μm微孔濾膜以保護分離柱，洗脫液為蒸餾水，流速為2mL/min，上樣體積為5mL，分部收集體積為8mL/管，紫外檢測器和示差折光檢測器檢測(RID-10A示差檢測器)在線監測洗脫情況；取第6-14管合并，濃縮，冷凍干燥得到黑靈芝提取物PSG，為黃色或棕色的絮狀固體；

(3)用胃蛋白酶或胰蛋白酶對PSG進行水解，得到PSG-胃或PSG-胰。

2.如權利要求1所述的一種通過蛋白酶解得到的新型抗腫瘤化合物，其特征在于：所述步驟(3)具體為：

①模擬胃液(pH3檸檬酸-磷酸氫二鈉緩沖液)的配制：

0.2M磷酸氫二鈉溶液配制：稱取磷酸氫二鈉(Na₂HPO₄·2H₂O)35.63g(精確至0.0002g)，用蒸餾水定容至1000mL；

0.1M檸檬酸的配制：稱取檸檬酸(C₆H₈O₇·H₂O)21.0g(精確至0.0002g),用蒸餾水定容至1000mL；

吸取0.2M磷酸氫二鈉溶液4.11mL與0.1M檸檬酸溶液15.89mL,混合即為pH3檸檬酸-磷酸氫二鈉緩沖液；

②PSG-胃的制備：將PSG溶于pH3的模擬胃液中，配制成2％的溶液，加入5％的胃蛋白酶在37℃水解5h后，中和后迅速升溫至60℃滅酶5min，用蒸餾水透析1d，醇析后真空干燥即得樣品，記為PSG-胃5。

3.如權利要求1所述的一種通過蛋白酶解得到的新型抗腫瘤化合物，其特征在于：所述步驟(3)具體為：PSG-胰的制備：將PSG溶于蒸餾水中配成2％的溶液，調pH至8，加入5％的胰蛋白酶，在37℃下水解5h后，中和后迅速升溫至60℃滅酶5min，用蒸餾水透析1d后，醇析后真空干燥即得樣品，記為PSG-胰5。