[發明專利]一種海馬1H?NMR指紋圖譜的構建方法和用途

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• 申請號: 201710303116.6
• 申請日: 2017-05-03
• 公開（公告）號: CN107102021A
• 公開（公告）日: 2017-08-29
• 發明（設計）人: 王佩義;郝晉琪;梁海東;秦雪梅;趙曉喆;趙思俊;田俊生;高曉霞
• 申請（專利權）人: 山西廣譽遠國藥有限公司
• 主分類號: G01N24/08
• 分類號: G01N24/08
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種海馬1H-NMR指紋圖譜的構建方法，其特征在于，包含以下步驟：（1）稱取海馬粉末于離心管中，分別加入超純水、甲醇、氯仿，渦旋，超聲提取，離心后取上層清液至圓底燒瓶，減壓濃縮蒸干；（2）用氘代甲醇與緩沖重水溶解提取物，離心后移取上清液于核磁管中；（3）將樣品在25℃下于600MHz NMR儀上測定，采用noesygppr1d脈沖序列，測定頻率600.13 MHz，掃描次數64次，譜寬12345.7Hz，脈沖時間14.0s，采樣時間2.6542s，弛豫時間1.0s，采樣數據點65536，FID分辨率0.188Hz，以Methnol-d4進行鎖場。

2.根據權利要求1所述的一種海馬1H-NMR指紋圖譜的構建方法，其特征在于，步驟（2）中緩沖重水為KH2PO4溶于D2O，以1mol·L?1 氘代氫氧化鈉溶液調節至pH=6.0的含0.05% 3-（三甲基硅基）丙酸鈉鹽的溶液。

3.根據權利要求1或2所述的一種海馬1H-NMR指紋圖譜的構建方法，其特征在于，對得到的海馬1H-NMR圖譜進行化學成分指認鑒別，利用對照品對照并結合核磁共振譜峰化學位移及偶合常數進行分析，確定海馬指紋圖譜的特征峰包括：異亮氨酸（=0.960.02，t，J=7.2Hz；=1.030.02，d，J=6.6Hz）、亮氨酸（=0.970.02，t，J=6.6Hz）、纈氨酸（=1.010.02，d，J=7.2Hz；=1.060.02，d，J=7.2Hz）、乳酸（=1.330.02，d，J=7.2Hz；=4.060.02，q，J=7.2Hz）、丙氨酸（=1.490.02，d，J=7.2Hz）、乙酸（=1.930.02，s）、谷氨酸（=2.100.02，m；=2.380.02，m）、琥珀酸（=2.450.02，s）、肌酸（=2.750.02，s）、膽堿（=3.220.02，s）、甜菜堿（=3.280.02，s）、牛磺酸（=3.410.02，t，J=6.6Hz）、甘氨酸（=3.510.02，s）、甘油（=3.540.02，dd，J=6Hz，11.4Hz；=3.630.02，dd，J=4.2Hz，11.4Hz）、乳糖（=5.190.02，d，J=3.6Hz）、延胡索酸（=6.530.02，s）、酪氨酸（=6.850.02，d，J=8.4Hz；=7.180.02，d，J=8.4Hz）、腺嘌呤（=8.180.02，s）、肌苷（=8.220.02，s）、甲酸（=8.470.02，s）。

4.權利要求3所述的海馬指紋圖譜構建方法的用途，其特征在于，可用于海馬的品質評價和質量控制。

5.根據權利要求4所述的海馬指紋圖譜構建方法的用途，其特征在于，可用于區分不同海馬品種，包括以下步驟：收集不同品種海馬樣本，按照上述方法對各海馬進行測試和圖譜處理，得到不同品種海馬的1H-NMR指紋圖譜；以步長δ0.02ppm對海馬核磁圖譜進行分段積分，積分段為δ-0.11～9.01，其中δ4.75～5.05（殘余水峰）、δ3.29～3.33（殘余甲醇峰）不進行積分，將積分后的數據導入SIMCA-P 13.0軟件中進行PCA（主成分）分析。

6.根據權利要求4所述的海馬指紋圖譜構建方法的用途，其特征在于，可用于比較不同海馬的化學成分含量及均一性，包括以下步驟：收集不同海馬樣本，按照上述方法對各海馬進行測試和圖譜處理，得到不同海馬的1H-NMR指紋圖譜；對不同海馬1H -NMR指紋圖譜進行比較分析，以3-（三甲基硅基）丙酸鈉鹽峰面積為“1”，作為內標，計算各化學成分的相對含量。

7.根據權利要求4-6中任一項所述的海馬指紋圖譜構建方法的用途，其特征在于，所述海馬樣本為線紋海馬，刺海馬，大海馬，三斑海馬，小海馬中的一種或多種。