[發(fā)明專利]毛發(fā)中可卡因類物質(zhì)的提取和檢測(cè)方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710301978.5
• 申請(qǐng)日: 2017-05-02
• 公開（公告）號(hào): CN108802205A
• 公開（公告）日: 2018-11-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉曉云;王平;何小維;王繼華
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 廣州正孚檢測(cè)技術(shù)有限公司
• 主分類號(hào): G01N30/02
• 分類號(hào): G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 廣州華進(jìn)聯(lián)合專利商標(biāo)代理有限公司 44224
• 代理人: 曾銀鳳;萬志香

本發(fā)明涉及一種毛發(fā)中可卡因類物質(zhì)的提取和檢測(cè)方法。該提取方法包括以下步驟：（1）將毛發(fā)清洗后，用液氮研磨，得毛發(fā)粉末；（2）取研磨后的毛發(fā)粉末加入復(fù)合處理液，進(jìn)行超聲處理，離心，取上清液加入磷酸緩沖液A進(jìn)行緩沖，得毛發(fā)預(yù)處理液；所述復(fù)合處理液為含有牛血清蛋白和吐溫的磷酸緩沖溶液B；（3）將毛發(fā)預(yù)處理液注入經(jīng)平衡后的固相萃取柱，依次用水、鹽酸溶液、甲醇和乙酸乙酯洗滌雜質(zhì)，再用二氯甲烷、甲醇和氨水的混合溶液進(jìn)行洗脫，收集洗脫液，即得。將收集的洗脫液用LC?MS/MS的方法進(jìn)行檢測(cè)，即可有效檢測(cè)出毛發(fā)中含量甚微的可卡因類物質(zhì)。該提取和檢測(cè)方法操作簡(jiǎn)單，條件溫和，釋放效率高，檢測(cè)靈敏度高。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥檢測(cè)技術(shù)，特別是涉及一種毛發(fā)中可卡因類物質(zhì)的提取和檢測(cè)方法。

背景技術(shù)

近年來，毛發(fā)類的檢材因其反應(yīng)濫用藥物信息較全面，為了確認(rèn)檢查對(duì)象是否吸毒以及攝毒程度，該類檢材經(jīng)常作為司法鑒定和法庭科學(xué)的證據(jù)，也被廣泛應(yīng)用于臨床毒物學(xué)、興奮劑控制等其他領(lǐng)域。

毛發(fā)中成分復(fù)雜，存在大量有機(jī)成分的干擾物質(zhì)，為檢測(cè)毛發(fā)中的可卡因及其體內(nèi)代謝物苯甲酰愛康寧，須建立特異性較強(qiáng)的前處理方法分離提取目標(biāo)物。因可卡因和苯甲酰愛康寧和黑色頭發(fā)的結(jié)合程度較高，需采取較為苛刻的前處理?xiàng)l件來釋放毛發(fā)中這兩種成分。現(xiàn)有技術(shù)中，毛發(fā)中毒品檢測(cè)通常采用酸水解、堿水解、酶水解等方法進(jìn)行提取，水解時(shí)間較長(zhǎng)，時(shí)效性較差。

比如，沈敏等開發(fā)了一種頭發(fā)中毒品及代謝物的篩選分析方法：毛發(fā)樣本經(jīng)洗滌后用0.1mol·L^-1的鹽酸溶液2mL，在45℃水浴中水解過夜，取出，冷卻后調(diào)節(jié)pH值約為9，用乙酸乙酯提取，取有機(jī)層加入酸性甲醇吹干，用MSTFA微波衍生化，供GCMS分析。[沈敏,沈保華,向平.GC/MS/MS法在頭發(fā)中毒品及代謝物的篩選分析中的應(yīng)用[J].質(zhì)譜學(xué)報(bào),2002,23(1):11-11]。該方法酸水解時(shí)間太長(zhǎng)，時(shí)效性較差；使用氣質(zhì)聯(lián)用法檢測(cè)靈敏度不高。

發(fā)明內(nèi)容

基于此，本發(fā)明提供了一種毛發(fā)中可卡因類物質(zhì)的提取方法，該提取方法條件較為溫和，提取時(shí)間短，提取效率高，特異性強(qiáng)。

具體技術(shù)方案如下：

一種毛發(fā)中可卡因類物質(zhì)的提取方法，包括以下步驟：

(1)將毛發(fā)清洗后，用液氮研磨，得毛發(fā)粉末；

(2)取研磨后的毛發(fā)粉末加入復(fù)合處理液，進(jìn)行超聲處理，離心，取上清液加入磷酸緩沖液A進(jìn)行緩沖，得毛發(fā)預(yù)處理液；所述復(fù)合處理液為含有牛血清蛋白和吐溫的磷酸緩沖溶液B；

(3)將毛發(fā)預(yù)處理液注入經(jīng)平衡后的固相萃取柱，依次用水、鹽酸溶液、甲醇和乙酸乙酯洗滌雜質(zhì)，再用二氯甲烷、甲醇和氨水的混合溶液進(jìn)行洗脫，收集洗脫液，即得。

在其中一些實(shí)施例中，步驟(2)所述的復(fù)合處理液為0.05-0.5mol/L的磷酸緩沖溶液B，并且含有1-5％的牛血清蛋白和0.05-0.15％的吐溫，且pH值為2-3。

在其中一些實(shí)施例中，步驟(2)所述復(fù)合處理液與所述毛發(fā)粉末的配比為1mL:5～8g。

在其中一些實(shí)施例中，步驟(2)所述超聲處理的溫度為37～80℃，時(shí)間為1.5～12h。

在其中一些實(shí)施例中，步驟(2)所述超聲處理的溫度為65～75℃，時(shí)間為2～4h。

在其中一些實(shí)施例中，步驟(2)所述磷酸緩沖液A的pH為5.5-6.5。

在其中一些實(shí)施例中，步驟(2)所述磷酸緩沖液A與所述上清液的體積比為1:2.5～3.5。

在其中一些實(shí)施例中，步驟(3)所述固相萃取柱依次經(jīng)過甲醇、磷酸緩沖液C進(jìn)行平衡，所述磷酸緩沖液C的pH為5.0～7.0。