[發(fā)明專利]一種豬病毒性傳染病血清IgG抗體多重ELISA檢測試劑盒及其檢測方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710301560.4
• 申請日: 2017-05-02
• 公開（公告）號: CN107064502B
• 公開（公告）日: 2019-07-12
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 尹雙輝;楊順利;蔡建平;尚佑軍;袁莉
• 申請（專利權(quán)）人: 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/543;G01N33/577;G01N21/31;G01N21/78
• 代理公司: 甘肅省知識產(chǎn)權(quán)事務(wù)中心 62100
• 代理人: 張克勤

本發(fā)明公開了一種豬病毒性傳染病血清IgG抗體多重ELISA檢測試劑盒及其檢測方法，屬于生物領(lǐng)域，以解決現(xiàn)有血清抗體ELISA試劑盒是只適合單一病原產(chǎn)生的抗體檢測，無法同時檢測多種病原產(chǎn)生的血清抗體的問題。本發(fā)明利用SPA蛋白具有特異性結(jié)合豬血清中所有IgG抗體的生物學(xué)功能。SPA蛋白可以特異性結(jié)合豬血清樣品中的所有類型IgG抗體，如果待檢測樣品中存在抗三種病原編碼的4種蛋白的抗體，也能夠與SPA蛋白發(fā)生特異性結(jié)合，實現(xiàn)一種抗原同時捕獲3種病原感染或免疫后產(chǎn)生的4血清IgG抗體(抗CSFV的E2蛋白抗體、抗PCV2的Cap蛋白抗體和抗PrV的gB和gE蛋白抗體的)的目的。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物領(lǐng)域，具體涉及一種豬病毒性傳染病血清IgG抗體多重ELISA檢測試劑盒及其檢測方法。

背景技術(shù)

病毒性傳染病已成為威脅我國生豬養(yǎng)殖健康發(fā)展的嚴(yán)重障礙，其爆發(fā)和流行給養(yǎng)豬業(yè)者造成了極大經(jīng)濟損失。目前，包括豬瘟病毒(CSFV)、豬圓環(huán)病毒2型(PCV2)和豬偽狂犬病毒(PrV)是養(yǎng)豬業(yè)重點防控的病毒性疫病。在生豬疾病的預(yù)防工作中，通過實時檢測和評價疫苗免疫后血清中抗體水平和區(qū)分抗體來源是評價疫苗接種效果、保護豬群健康的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。豬病毒性傳染性疾病的血清抗體檢測方法主要包括酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)、乳膠凝集試驗、血凝試驗、病毒中和試驗、單層酶聯(lián)免疫吸附實驗等。由于ELISA方法操作簡單、成本低廉、對試驗條件要求低、敏感性和穩(wěn)定性好、可以評價抗體水平和種類、適合規(guī)模化檢測血清樣本且結(jié)果判定可標(biāo)準(zhǔn)化，因此，是目前應(yīng)用動物疫病血清抗體水平監(jiān)控和評價體系中應(yīng)用最廣泛的檢測手段。

常用血清抗體檢測ELISA方法基本原理是，利用預(yù)先包被在微孔板中來自待檢測疫病的抗原(重組抗原或滅活完整病原顆粒)結(jié)合血清樣本中的特異性IgG抗體，加入抗IgG的酶(化學(xué)發(fā)光物、熒光材料等)標(biāo)記的第二抗體同與抗原結(jié)合的IgG抗體反應(yīng)，來檢測待檢測樣本中的抗體含量或者種類。根據(jù)抗原抗體反應(yīng)模式和操作程序的差異，ELISA方法可分為包括間接ELISA、阻斷ELISA和競爭ELISA。動物疫病檢測領(lǐng)域常用的血清抗體ELISA試劑盒是只適合單一病原產(chǎn)生的抗體檢測，尚未見到一種試劑盒可以同時檢測多種病原產(chǎn)生的血清抗體的產(chǎn)品。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種豬病毒性傳染病血清IgG抗體多重ELISA檢測試劑盒，以解決現(xiàn)有血清抗體ELISA試劑盒是只適合單一病原產(chǎn)生的抗體檢測，無法同時檢測多種病原產(chǎn)生的血清抗體的問題。

本發(fā)明的另一個目的是提供一種用豬病毒性傳染病血清IgG抗體多重ELISA檢測試劑盒進行檢測的方法。

本發(fā)明技術(shù)方案如下：一種豬病毒性傳染病血清IgG抗體多重ELISA檢測試劑盒，包括預(yù)包被SPA蛋白的檢測板、血清樣品稀釋液、洗滌液、顯色液、終止液、四種病原的陰陽性標(biāo)準(zhǔn)對照血清、以及HRP分別標(biāo)記的CSFV的E2抗原、PCV2的Cap抗原、PrV的gB和gE抗原。

優(yōu)選地，所述預(yù)包被SPA蛋白的檢測板所包被SPA蛋白的包被量為2ng～28ng/孔，包被稀釋液為50mmol/L的pH值為9.6的碳酸鹽緩沖液。制備抗原包被板的目的是捕獲血清樣本中所有類型的IgG抗體。不同的濃度直接影響到檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。

優(yōu)選地，所述預(yù)包被SPA蛋白的檢測板中包被用碳酸鹽緩沖液每毫升的組成為1.59mg Na₂CO₃和2.93mg NaHCO₃，去離子水充分溶解后保存于4℃溫度下。碳酸鹽緩沖液條件下，SPA抗原可以穩(wěn)定吸附在酶標(biāo)板上。