[發(fā)明專利]一種新型包載雷公藤甲素和羥基喜樹(shù)堿的多臂聚乙二醇納米藥物的制備方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710300322.1
• 申請(qǐng)日: 2017-04-29
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN107137720A
• 公開(kāi)（公告）日: 2017-09-08
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 雷建都;劉彥雪;徐文楊;羅敏;鄭督
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 北京林業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): A61K47/69
• 分類號(hào): A61K47/69;A61K47/60;A61K31/585;B82Y5/00;A61P35/00;A61K31/4745
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技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及了一種新型包載雷公藤甲素和羥基喜樹(shù)堿的多臂聚乙二醇納米藥物的制備方法，特別是涉及一種利用多臂聚乙二醇與疏水藥物的反應(yīng)，同另一種疏水藥物自組裝形成納米粒子的方法，屬于先進(jìn)納米技術(shù)和生物制藥領(lǐng)域。

背景技術(shù)

雷公藤甲素（Triptolide, TP）是中藥雷公藤（Tripterygium wilfordii Hook. f.）中分離出的活性最高的環(huán)氧化二萜內(nèi)酯化合物，是雷公藤的主要有效成分之一。由于雷公藤的生理活性強(qiáng)，具有顯著的免疫抑制、抗炎、抗腫瘤和抗生育作用。但它屬于毒性很強(qiáng)的藥物，臨床不良反應(yīng)的發(fā)生頻率遠(yuǎn)高于其它藥物，主要發(fā)生在消化系統(tǒng)、泌尿系統(tǒng)、生殖系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)、骨髓和血液系統(tǒng)。其中又以消化系統(tǒng)最為常見(jiàn)，主要表現(xiàn)為惡心、嘔吐、腹痛、腹瀉及消化道出血等。因此，研究新型的給藥系統(tǒng)以降低其毒性具有十分重要的意義。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種新型包載雷公藤甲素和羥基喜樹(shù)堿的多臂聚乙二醇納米藥物的制備方法，該方法具有步驟簡(jiǎn)單，成本低，載藥材料無(wú)毒，聯(lián)合載藥效果好的優(yōu)點(diǎn)。

本發(fā)明的上述目的通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：多臂聚乙二醇與雷公藤甲素偶聯(lián)，在自組裝過(guò)程中包裹另一種抗癌藥物羥基喜樹(shù)堿，形成雙載藥系統(tǒng)的納米粒子膠束。具體步驟如下：

（1）將多臂聚乙二醇分散于吡啶中，濃度為0.01-5 毫克/毫升，磁力攪拌10-30分鐘，使其溶解；

（2）向上述溶液中加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽（EDC），激活羧基30分鐘，再加入催化劑4-二甲氨基吡啶（DMAP）；

（3）取適量雷公藤甲素溶于吡啶，并轉(zhuǎn)移到多臂聚乙二醇溶液中，35℃反應(yīng)過(guò)夜，并連續(xù)通入氮?dú)猓コセ磻?yīng)生成的水；

（4）向反應(yīng)后的混合液中1:3（體積比）的比例加入無(wú)水乙醚，出現(xiàn)絮狀沉淀，4000轉(zhuǎn)離心30分鐘，收集沉淀，繼續(xù)用乙醚洗滌沉淀兩次，離心收集固體沉淀；

（5）將上述所得固體沉淀溶于去離子水，用磷酸鹽緩沖溶液透析12小時(shí)，并輕微攪拌透析外液，加快透析速度，每隔4小時(shí)更換透析外液；

（6）將上述透析物零下80℃冷凍過(guò)夜，并冷凍干燥48小時(shí)，得到偶聯(lián)物白色粉末；

（7）取上述粉末適量與羥基喜樹(shù)堿共同溶于二甲基亞砜，攪拌均勻，然后緩慢滴入劇烈攪拌的去離子水中，自組裝得到納米粒子，將溶液8000轉(zhuǎn)離心30分鐘，收集沉淀物，重新分散在去離子水中，透析6小時(shí)，透析物零下80℃冷凍過(guò)夜，并冷凍干燥48小時(shí)，得到白色粉末，即為多臂聚乙二醇-雷公藤甲素（羥基喜樹(shù)堿）納米藥物。

所述的多臂聚乙二醇可為單臂，四臂或八臂聚乙二醇，可以含不同的官能團(tuán)，與不同拒水藥物發(fā)生反應(yīng)，且分子量2000~80000之間；

所述的不溶水藥物雷公藤甲素依然適用于含反應(yīng)功能基團(tuán)的其它拒水藥物，如熊果酸；

所述的包裹藥物羥基喜樹(shù)堿可以由其它疏水性強(qiáng)的藥物替代，或者納米級(jí)金屬，納米級(jí)金屬氧化物；

所述的吡啶用四氫呋喃、二甲基亞砜、二氯甲烷替代，其偶聯(lián)方法仍然適用；

所述的納米粒子粒徑均一，且在10-100nm。

本發(fā)明具有以下優(yōu)點(diǎn)：

1）本發(fā)明的反應(yīng)機(jī)理是通過(guò)高分子化合物多臂聚乙二醇的羧基與雷公藤甲素的羥基發(fā)生酯化反應(yīng)，得到多臂聚乙二醇藥物偶聯(lián)物。

2）本發(fā)明的自組裝過(guò)程是通過(guò)反應(yīng)到多臂聚乙二醇上的疏水藥物基團(tuán)的拒水作用，形成空心內(nèi)核，多臂聚乙二醇的親水端為外層，疏水藥物羥基喜樹(shù)堿為內(nèi)核核心，自組裝形成的兩親性納米粒子，納米粒子均一。

3）本發(fā)明針對(duì)運(yùn)載兩種疏水藥物的設(shè)計(jì)，根據(jù)兩種疏水藥物的不同作用機(jī)制，可實(shí)現(xiàn)聯(lián)合殺死腫瘤細(xì)胞。

4）本發(fā)明不需要高溫高壓等耗能設(shè)備，亦不需要復(fù)雜裝置，所用化學(xué)試劑用量少，可回收，工藝簡(jiǎn)單，降低生產(chǎn)成本。

附圖說(shuō)明

圖1為本發(fā)明制備多臂聚乙二醇-雷公藤甲素雷公藤甲素的紫外圖。

圖2為本發(fā)明制備多臂聚乙二醇-雷公藤甲素雷公藤甲素（羥基喜樹(shù)堿）納米藥物的場(chǎng)發(fā)射電鏡形貌圖。

圖3為本發(fā)明制備多臂聚乙二醇-雷公藤甲素雷公藤甲素（羥基喜樹(shù)堿）納米藥物的掃描電鏡形貌圖。

具體實(shí)施方式

實(shí)施例一

（1）取多臂聚乙二醇1g，分散于20 mL吡啶中，磁力攪拌30 min，使其溶解；