[發明專利]一種熒光傳感器的制備方法、一種檢測酪氨酸酶的方法

有效

• 申請號: 201710299516.4
• 申請日: 2017-05-02
• 公開（公告）號: CN107084954B
• 公開（公告）日: 2019-09-27
• 發明（設計）人: 王廣鳳;萬靖
• 申請（專利權）人: 安徽師范大學
• 主分類號: C12Q1/26
• 分類號: C12Q1/26
• 代理公司: 蕪湖安匯知識產權代理有限公司 34107
• 代理人: 任晨晨

本發明提供了一種熒光傳感器的制備方法、一種檢測酪氨酸酶的方法，與現有技術相比，本發明利用DNA 1和DNA 2堿基互補配對，DNA1和DNA2的DNA設計中，都包含一段含有30個T的堿基。該聚30T的堿基可以使Cu²⁺還原為Cu⁰，使之產生熒光。然后，加入抗壞血酸鈉和硫酸銅，制備得到TTE DNA銅納米粒子，具有熒光性能，利用酪氨酸酶可以快速有效的猝滅TTE DNA銅納米粒子熒光的原理，來達到定量檢測酪氨酸酶的目的。使用的試劑是低成本，不需要復雜的有機熒光化合物的合成，傳感器設計過程非常簡單，無需任何標記和修飾探針。檢測準確度高、靈敏、檢測限低。

技術領域

本發明屬于熒光傳感器技術領域，具體涉及一種熒光傳感器的制備方法、一種檢測酪氨酸酶的方法。利用TTE DNA(聚T兩頭被系住的DNA)銅納米粒子的優越熒光性能，基于酪氨酸酶能猝滅TTE DNA銅納米粒子溶液的事實，構建TTE DNA水凝膠可攜帶的可視化的檢測酪氨酸酶。

背景技術

酪氨酸酶是一種典型的多酚氧化酶，是一種含銅酶，廣泛分布于各種類型的生物體如：植物，動物組織和真菌中。酪氨酸酶能夠催化酚類底物羥基化為鄰苯二酚的衍生物，進一步氧化成鄰醌類產品。該反應已被公認為是一些天然色素合成的關鍵過程，因此，酪氨酸酶是被認為是治療一些色素減退相關問題的核心。此外，因為其對多巴胺神經毒性，酪氨酸酶的紊亂也可能導致帕金森病與神經的變性。更重要的是，生物體內中酪氨酸酶的反應會導致嚴重的皮膚病，如I型自身白化病，并且酪氨酸酶的累計被認為是黑素瘤癌癥的生物標志。因此，靈敏的檢測酪氨酸酶活性為生物醫學提供可靠的診斷是非常緊迫的。

水凝膠是一種交聯的親水聚合物，并且它可以表現出特殊的性質和一些獨特的特征。詳細地說，凝膠屬于一種特殊的軟物質并由雙連續部分組成：最小的組件是三維網絡，主要部分是水性介質。這種網絡對包裹試劑和固定探針是十分理想的。包裹的探針可以在水凝膠中保持其天然的結構和功能。由于水凝膠的多孔性質，外部目標或刺激都可以通過多孔接近內部探針。另外，因為水凝膠是透明的且背景低，有少干擾光學檢測。由于水凝膠的優越性能，已被發展在生物化學的領域。

貴金屬納米團簇作為新一代熒光探針因為它們的高光穩定性，耐光性，和超小尺寸引起了相當大的關注。包括：DNA模板的金納米粒子-銀納米粒子-銅納米粒子。特別地，對于DNA為模板的制備的銅納米粒子，由于其制備簡單以及在溫和環境條件下快速高效制備和環境友好性，受到了廣泛的關注。雖然已經有課題組制備出了DNA銅納米粒子的水凝膠，但是將DNA銅納米粒子制作水凝膠中便攜可視化的檢測生物物質的報道并不多。

發明內容

本發明的目的在于提供一種熒光傳感器的制備方法，利用TTE DNA(聚T兩頭被系住的DNA)模板制備出熒光性能更好的銅納米粒子作為傳感器。

本發明還提供了一種檢測酪氨酸酶的方法，利用酪氨酸酶可以快速有效的猝滅TTE DNA銅納米粒子熒光的原理，來達到定量檢測酪氨酸酶的目的。

本發明提供的一種熒光傳感器的制備方法，包括以下步驟：

1)DNA 1和DNA2分別用緩沖溶液稀釋，分別得到DNA 1溶液和DNA 2溶液，待用；

2)混合稀釋后的DNA 1溶液和DNA2溶液，培養，使DNA 1和DNA 2堿基互補配對；

3)培養結束后，加入抗壞血酸鈉溶液和CuSO₄溶液，得到TTE DNA銅納米粒子，熒光傳感器制備完成。

步驟1)中所述緩沖液為10mM MOPS(3-(N-嗎啉基)丙磺酸)PH＝7.6的緩沖溶液。

步驟1)具體為：分別將DNA 1和DNA 2用10mM PH＝7.6的MOPS的緩沖溶液稀釋到100μM，得到DNA 1溶液和DNA2溶液；