[發(fā)明專利]一種熒光傳感器的制備方法、一種檢測(cè)酪氨酸酶的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710299516.4
• 申請(qǐng)日: 2017-05-02
• 公開（公告）號(hào): CN107084954B
• 公開（公告）日: 2019-09-27
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王廣鳳;萬靖
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 安徽師范大學(xué)
• 主分類號(hào): C12Q1/26
• 分類號(hào): C12Q1/26
• 代理公司: 蕪湖安匯知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 34107
• 代理人: 任晨晨

1.一種熒光傳感器檢測(cè)酪氨酸酶的方法，其特征在于，檢測(cè)方法為：向制備的熒光傳感器中加入不同濃度的酪氨酸酶溶液，3min后用熒光儀記錄體系的熒光強(qiáng)度，根據(jù)不同濃度的酪氨酸酶溶液猝滅TTE DNA銅納米粒子程度不同，構(gòu)建熒光強(qiáng)度與酪氨酸酶溶液的線性關(guān)系，即可定量檢測(cè)酪氨酸酶；

所述熒光傳感器的制備方法包括以下步驟：

1)DNA1和DNA2分別用緩沖溶液稀釋，分別得到DNA1溶液和DNA2溶液，待用；

2)混合稀釋后的DNA1溶液和DNA2溶液，培養(yǎng)，使DNA1和DNA2堿基互補(bǔ)配對(duì)；

3)培養(yǎng)結(jié)束后，加入抗壞血酸鈉溶液和CuSO₄溶液，得到TTE DNA銅納米粒子，熒光傳感器制備完成；

步驟1)中所述緩沖液為10mM MOPS(3-(N-嗎啉基)丙磺酸)PH＝7.6的緩沖溶液；

步驟1)中所述DNA1序列：GCAGAGTTGAGACCAT30TCAGAAGGCAAAAAA；DNA2序列：TTTTTTGCCTTCTGAT30TGGTCTCAACTCTGC。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的熒光傳感器檢測(cè)酪氨酸酶的方法，其特征在于，步驟2)中所述培養(yǎng)是指：在室溫條件下培養(yǎng)15-30min。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的熒光傳感器檢測(cè)酪氨酸酶的方法，其特征在于，步驟3)具體為：將培養(yǎng)后的混合溶液置于240μL的MOPS緩沖溶液中，然后加入16μL100mM的抗壞血酸鈉和8μL10mM的CuSO₄溶液，室溫下反應(yīng)10-20min，即可。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的熒光傳感器檢測(cè)酪氨酸酶的方法，其特征在于，在步驟3)加入抗壞血酸鈉溶液和CuSO₄溶液之前加入瓊脂糖溶液，即可制備得到凝膠狀熒光傳感器。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的熒光傳感器檢測(cè)酪氨酸酶的方法，其特征在于，DNA1溶液和DNA2溶液培養(yǎng)結(jié)束后，加入瓊脂糖溶液，混合；然后，加入抗壞血酸鈉，混勻后，加熱融化瓊脂糖粉末，凝固前置于容器中，室溫下冷卻，得到TTE DNA水凝膠，將CuSO₄溶液注射到TTEDNA水凝膠中，反應(yīng)后，即凝膠狀熒光傳感器。

6.根據(jù)權(quán)利要求4或5所述的熒光傳感器檢測(cè)酪氨酸酶的方法，其特征在于，檢測(cè)方法為：向制備的凝膠狀熒光傳感器注射不同濃度的酪氨酸酶溶液，20min后通過數(shù)碼相機(jī)記錄，據(jù)不同濃度的酪氨酸酶溶液猝滅TTE DNA銅納米粒子程度不同，可視化檢測(cè)酪氨酸酶。