[發(fā)明專利]一種提純植物多糖的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710299337.0
• 申請日: 2017-05-02
• 公開（公告）號(hào): CN107082821B
• 公開（公告）日: 2019-06-28
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 馬海樂;李云亮;楊雪;毛麗;黃姍芬;王禹程
• 申請（專利權(quán)）人: 江蘇大學(xué)
• 主分類號(hào): C08B37/00
• 分類號(hào): C08B37/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發(fā)明公開了一種提純植物多糖的方法，屬于食品分離純化領(lǐng)域。該方法是將樣品進(jìn)行蛋白酶酶解，干燥后，利用三氟甲磺酸切割結(jié)合多糖的多肽，采用芴甲氧羰酰氯法或氯甲酸叔丁酯法將游離多肽的氨基端衍生化，用乙酸乙酯萃取去除多酚及衍生化的多肽物質(zhì)，制備得到純化過的多糖。此方法的優(yōu)點(diǎn)在于：1、此方法提純后，蛋白和多酚的含量大幅度降低。2、本發(fā)明分離出的高純度的多糖。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及食品分離純化領(lǐng)域，特別是指一種提純植物多糖的方法。

背景技術(shù)

多糖是由糖苷鍵結(jié)合的糖鏈，至少要超過10個(gè)的單糖組成的聚合糖高分子碳水化合物，可用通式(C₆H₁₀O₅)_n表示。由相同的單糖組成的多糖稱為同多糖，如淀粉、纖維素和糖原，以不同的單糖組成的多糖稱為雜多糖，如阿拉伯膠是由戊糖和半乳糖等組成。它是生物體內(nèi)一種重要的組成成分，常規(guī)的農(nóng)副產(chǎn)品植物資源，例如大米、馬鈴薯等，一般均含有較多的多糖（分為游離型多糖和結(jié)合型多糖），同時(shí)也含有較多的蛋白或多酚，許多多糖能與蛋白之間共價(jià)結(jié)合形成糖蛋白。有些糖蛋白的比例非常高，大部分分布在細(xì)胞膜上，具有識(shí)別功能。多酚類成分的化學(xué)結(jié)構(gòu)中含有較多的羥基，在植物體內(nèi)能與蛋白質(zhì)、多糖或其他物質(zhì)以氫鍵和疏水鍵形式形成較為穩(wěn)定的復(fù)合物。研究發(fā)現(xiàn)，植物多糖具有多方面的生物活性，如抗腫瘤、免疫促進(jìn)、抗炎、抗病毒、抗凝血、降血糖等。然而，要分析多糖的功能首先要獲得較純多糖樣品，去除樣品原料中的蛋白和多酚，防止其對結(jié)果進(jìn)行干擾。

常用的多糖的分離方法為水溶醇沉法，利用乙醇可以將溶液中的多糖沉淀下來，從而提純多糖。其缺點(diǎn)在于一方面非結(jié)合蛋白、多酚能與多糖形成共沉淀，另一方面沉淀的多糖含有部分結(jié)合蛋白，導(dǎo)致提取的多糖純度低。結(jié)合型多糖的蛋白與多糖之間的共價(jià)鍵可以采用化學(xué)裂解法切割，常用的試劑為三氟甲磺酸。

由于多酚物質(zhì)在分子結(jié)構(gòu)中具有酚羥基、羥基、羧基等，具有一定的極性，在植物體內(nèi)通常與蛋白質(zhì)、多糖以氫鍵和疏水鍵形式形成穩(wěn)定的化合物，而有機(jī)溶劑具有斷裂氫鍵的作用，因此可以用乙酸乙酯、丙酮、乙醇等有機(jī)溶劑萃取，除去多酚。

為了盡可能多的除去蛋白和多酚，同時(shí)提高多糖的純度，需要一種有效的分離多糖的純化方法。在提純多糖之前先將糖蛋白中的蛋白與糖鏈分開，并對多酚進(jìn)行萃取，從而提高多糖純度的文獻(xiàn)還未見報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種工藝簡單，能夠制備高純度多糖的分離方法。具體為將樣品進(jìn)行蛋白酶酶解，干燥后，利用三氟甲磺酸切割結(jié)合多糖的多肽，采用9-芴甲氧羰基法（Fmoc）或叔丁氧羰基（Boc）法將游離多肽的氨基端衍生化，用乙酸乙酯萃取去除多酚及衍生化的多肽物質(zhì)，達(dá)到分離提純多糖的目的。

為了實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，其具體的技術(shù)方案如下：

一種提純植物多糖的方法，按照下述步驟進(jìn)行：

（1）蛋白酶解

將蛋白樣品加入蒸餾水混勻（底物濃度30~70 g/L），調(diào)節(jié)pH至8~9，溫度45~55℃，加入蛋白酶底與底物比為0.5~2.5%的堿性蛋白酶，酶解時(shí)間5~12 h，沸水浴滅酶10~20min，離心取上清液，凍干。

（2）糖蛋白鏈斷裂

準(zhǔn)確稱取上述絕干樣品加入到預(yù)冷的樣品管中，按0.3 mL/mg（蛋白酶酶解物樣品）加入三氟甲磺酸，快速封口，輕搖2~5 min使樣品溶解，于4℃下保溫30~60 min，偶爾搖動(dòng)，樣品管中加入少量2%溴酚藍(lán)指示劑，于-20℃下預(yù)冷，在干冰甲醇浴的環(huán)境下，用預(yù)冷的60%吡啶滴定，直至溴酚藍(lán)變成淺紫色或藍(lán)色，此時(shí)溶液pH約為6.0，最后對去離子水透析并冷凍干燥。

（3）分離多糖

將多肽進(jìn)行氨基端疏水性衍生化，增加與多糖的極性差異，可采用Fmoc或Boc法。