[發(fā)明專利]一種提純植物多糖的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710299337.0
• 申請(qǐng)日: 2017-05-02
• 公開（公告）號(hào): CN107082821B
• 公開（公告）日: 2019-06-28
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 馬海樂(lè);李云亮;楊雪;毛麗;黃姍芬;王禹程
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 江蘇大學(xué)
• 主分類號(hào): C08B37/00
• 分類號(hào): C08B37/00
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

1.一種提純植物多糖的方法，其特征在于，將樣品進(jìn)行蛋白酶酶解，干燥后，利用三氟甲磺酸切割結(jié)合多糖的多肽，采用9-芴甲氧羰基法或叔丁氧羰基法將游離多肽的氨基端衍生化，用乙酸乙酯萃取去除多酚及衍生化的多肽物質(zhì)，制備得到純化過(guò)的多糖；

所述的蛋白酶酶解：將蛋白樣品加入蒸餾水混勻，其底物濃度30~70 g/L，調(diào)節(jié)pH至8~9，溫度45~55℃，加入蛋白酶與底物比為0.5~2.5%的堿性蛋白酶，酶解時(shí)間5~12 h，沸水浴滅酶10~20 min，離心取上清液，凍干；

所述的三氟甲磺酸切割結(jié)合多糖的多肽：準(zhǔn)確稱取絕干樣品加入到預(yù)冷的樣品管中，按0.3 mL/mg樣品的比例加入三氟甲磺酸，快速封口，輕搖2~5 min使樣品溶解，于4℃下保溫30~60 min，偶爾搖動(dòng)，樣品管中加入少量2%溴酚藍(lán)指示劑，于-20℃下預(yù)冷，在干冰甲醇浴的環(huán)境下，用預(yù)冷的60%吡啶滴定，直至溴酚藍(lán)變成淺紫色或藍(lán)色，此時(shí)溶液pH約為6.0，最后用去離子水透析并冷凍干燥。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種提純植物多糖的方法，其特征在于，所述的9-芴甲氧羰基法：準(zhǔn)確稱取前述所制備的凍干樣品，溶解于10%碳酸鈉溶液中，樣品濃度為1~5%，加入少量丙酮，在0~4℃條件下加入與樣品質(zhì)量相同的芴甲氧羰酰氯，攪拌反應(yīng)4~12 h后，冷卻，并用濃鹽酸酸化到pH至2，100 mL乙酸乙酯萃取3~5次，將多酚和被保護(hù)的多肽溶于乙酸乙酯中，將水相過(guò)濾，經(jīng)500 Da透析袋透析，去除小分子鹽雜質(zhì)，濃縮干燥得純化的多糖。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種提純植物多糖的方法，其特征在于，所述的叔丁氧羰基法：準(zhǔn)確稱取前述所制備的凍干樣品放入燒杯中，倒入樣品質(zhì)量10 mL/g凍干樣品的水溶解，將二碳酸二叔丁酯按照凍干樣品重量的0.5~2倍的比例，溶解于10 mL/g凍干樣品的1,4-二氧六環(huán)溶劑中，倒入上述燒杯，攪拌后用三乙胺調(diào)節(jié)pH至8~9，溶液變渾濁后繼續(xù)攪拌20 h，然后用石油醚作溶劑進(jìn)行萃取，分離出水溶液在冰浴條件下攪拌，用1 mol/L鹽酸調(diào)節(jié)pH至2~3，溶液再次變渾濁，再往溶液中加入適量飽和氯化鈉溶液，乙酸乙酯萃取3~5次，將多酚和被保護(hù)的Boc-多肽溶于乙酸乙酯中，將水相過(guò)濾，經(jīng)500 Da透析袋透析，去除小分子鹽雜質(zhì)，濃縮干燥得純化的多糖。