[發明專利]一種基于膠體金法檢測尿液中HIV（1+2）抗體試劑

在審

• 申請號: 201710293795.3
• 申請日: 2017-04-28
• 公開（公告）號: CN106970219A
• 公開（公告）日: 2017-07-21
• 發明（設計）人: 張誌
• 申請（專利權）人: 北京金豪制藥股份有限公司
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569
• 代理公司: 北京華科聯合專利事務所(普通合伙)11130
• 代理人: 王為,孟旭

1.一種基于膠體金法檢測尿液中HIV(1+2)抗體試劑的制備方法，其特征在于，以膠體金標記的SPA偶聯抗人IgG抗體制備膠體金結合物墊，作為顯色探針，在硝酸纖維素膜上混合包被gp41抗原和gp36抗原，作為檢測HIV 1型抗體和HIV 2型抗體的檢測線。

2.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，膠體金結合物墊的制備方法如下：

1)標記SPA，以0.2M碳酸鉀調節膠體金PH在8.2左右，10～30μg/ml金的比例加入SPA,反應30～60分鐘后，以BSA或PEG進行封閉，封閉液的終濃度1～10mg/ml，10000rpm離心10～60分鐘，棄上清，沉淀用含有2mg/ml BSA的10mM Tris-Hcl(pH8.2)緩沖液的復溶至原體積。

2)金標SPA偶聯抗人IgG抗體，在上述復溶后的金標SPA溶液中，每毫升溶液中加入抗人IgG抗體0.1～10μg，反應60min，10000rpm離心10～60分鐘，棄上清，沉淀用含0.5％BSA、5％蔗糖、0.1％Triton X-100、0.03％proclin-300的10mM Tris-Hcl(pH8.2)的緩沖液復溶至原體積。

3)冷凍干燥，將上述金標溶液鋪金后，-50℃預凍2小時后，抽真空進行升華凍干，制備膠體金結合物墊。

3.根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于，其中的膠體金結合物墊，通過金標SPA偶聯抗人IgG抗體，使抗人IgG抗體的有序性增強，即Fab端一致向外，增加有效抗體的數量，增強其結合尿液中游離蛋白的能力，同時，通過金標SPA偶聯抗人IgG，延長金標探針的手臂，增強其反應能力，提升產品的靈敏度。

4.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，在硝酸纖維素膜上混合包被的gp41抗原濃度為0.5～2.5mg/ml,gp36抗原濃度為0.1～0.5mg/ml。

5.一種檢測體系，包括SPA，膠體金，BSA，PEG，Tris-Hcl緩沖液，抗人IgG，蔗糖，Triton X-100，proclin-300。

6.權利要求5的檢測體系，為檢測卡，包括硝酸纖維素膜、金標墊，吸水紙、膠板和塑料卡殼，檢測卡設有檢測線顯示部分和樣本加樣孔，其中的金標墊按照權利要求2的方法制備。