[發(fā)明專利]一種豬繁殖與呼吸綜合征病毒抗體檢測方法及其應用在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 201710291561.5 | 申請日： | 2017-04-28 |
| 公開（公告）號： | CN107102148A | 公開（公告）日： | 2017-08-29 |
| 發(fā)明（設計）人： | 肖一紅;劉思當;商營利;曹勝亮;蔡新娜 | 申請（專利權）人： | 山東農(nóng)業(yè)大學 |
| 主分類號： | G01N33/68 | 分類號： | G01N33/68;G01N33/561;G01N33/535 |
| 代理公司： | 濟南譽豐專利代理事務所(普通合伙企業(yè))37240 | 代理人： | 李茜 |
| 地址： | 271018 *** | 國省代碼： | 山東;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 種豬 繁殖 呼吸 綜合征 病毒 抗體 檢測 方法 及其 應用 | ||
1.一種豬繁殖與呼吸綜合征病毒抗體檢測方法，其特征在于：所采用的包被抗原為重組的豬繁殖與呼吸綜合征病毒非結(jié)構(gòu)蛋白NSP4，其氨基酸序列如SEQ ID No.4所示，表達該蛋白的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示。
2.根據(jù)權利要求1所述方法，其特征在于：該方法為間接ELISA檢測方法，其中具體步驟如下：
抗原包被量：200ng，包被緩沖液為pH＝7.2的磷酸鹽緩沖液其1L溶液中含0.356g NaH2PO4，2.772g Na2HPO4·12H2O，8.5g NaCl，包被過夜；
洗滌：含有體積濃度為0.5‰的吐溫-20的pH 7.2的磷酸鹽緩沖液(PBS’T)，輕微振蕩1min后棄去，重復5次；
封閉：用含有2.5％脫脂奶粉的pH為7.2的PBS’T緩沖液的封閉液封閉，37℃孵育1h；
洗滌：含有體積濃度為0.5‰的吐溫-20的pH 7.2的磷酸鹽緩沖液(PBS’T)，輕微振蕩1min后棄去，重復5次；
血清樣品稀釋：用pH為7.2的PBS’T加體積濃度為2.5％脫脂奶粉按1:40稀釋，加入100μl；
洗滌：含有體積濃度為0.5‰的吐溫-20的pH 7.2的磷酸鹽緩沖液(PBS’T)，輕微振蕩1min后棄去，重復5次；
酶標抗體：辣根過氧化物酶標記的羊抗豬的抗體，用pH 7.2的磷酸鹽緩沖液(PBS’T)1:2000稀釋(購自美國Jackson ImmunoResearch公司)，100μl，37℃孵育60min；
洗滌：含有體積濃度為0.5‰的吐溫-20的pH 7.2的磷酸鹽緩沖液(PBS’T)，輕微振蕩1min后棄去，重復5次；
顯色：每孔加入底物TMB 100μl，37℃避光顯色15min；
終止：每孔加3mol/L的硫酸50μl，終止反應；
讀數(shù)：酶標儀OD 450nm讀取。
3.根據(jù)權利要求1所述方法，其特征在于：所述OD值的cut-off值為0.406。
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