[發(fā)明專利]一種豬繁殖與呼吸綜合征病毒抗體檢測方法及其應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710291561.5
• 申請日: 2017-04-28
• 公開（公告）號: CN107102148A
• 公開（公告）日: 2017-08-29
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 肖一紅;劉思當(dāng);商營利;曹勝亮;蔡新娜
• 申請（專利權(quán)）人: 山東農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/561;G01N33/535
• 代理公司: 濟(jì)南譽豐專利代理事務(wù)所(普通合伙企業(yè))37240
• 代理人: 李茜

1.一種豬繁殖與呼吸綜合征病毒抗體檢測方法，其特征在于：所采用的包被抗原為重組的豬繁殖與呼吸綜合征病毒非結(jié)構(gòu)蛋白NSP4，其氨基酸序列如SEQ ID No.4所示，表達(dá)該蛋白的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述方法，其特征在于：該方法為間接ELISA檢測方法，其中具體步驟如下：

抗原包被量：200ng，包被緩沖液為pH＝7.2的磷酸鹽緩沖液其1L溶液中含0.356g NaH₂PO₄，2.772g Na₂HPO₄·12H₂O，8.5g NaCl，包被過夜；

洗滌：含有體積濃度為0.5‰的吐溫-20的pH 7.2的磷酸鹽緩沖液(PBS’T)，輕微振蕩1min后棄去，重復(fù)5次；

封閉：用含有2.5％脫脂奶粉的pH為7.2的PBS’T緩沖液的封閉液封閉，37℃孵育1h；

洗滌：含有體積濃度為0.5‰的吐溫-20的pH 7.2的磷酸鹽緩沖液(PBS’T)，輕微振蕩1min后棄去，重復(fù)5次；

血清樣品稀釋：用pH為7.2的PBS’T加體積濃度為2.5％脫脂奶粉按1:40稀釋，加入100μl；

洗滌：含有體積濃度為0.5‰的吐溫-20的pH 7.2的磷酸鹽緩沖液(PBS’T)，輕微振蕩1min后棄去，重復(fù)5次；

酶標(biāo)抗體：辣根過氧化物酶標(biāo)記的羊抗豬的抗體，用pH 7.2的磷酸鹽緩沖液(PBS’T)1:2000稀釋(購自美國Jackson ImmunoResearch公司)，100μl，37℃孵育60min；

洗滌：含有體積濃度為0.5‰的吐溫-20的pH 7.2的磷酸鹽緩沖液(PBS’T)，輕微振蕩1min后棄去，重復(fù)5次；

顯色：每孔加入底物TMB 100μl，37℃避光顯色15min；

終止：每孔加3mol/L的硫酸50μl，終止反應(yīng)；

讀數(shù)：酶標(biāo)儀OD 450nm讀取。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述方法，其特征在于：所述OD值的cut-off值為0.406。