[發(fā)明專利]一種多糖及其制備方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710287165.5
• 申請(qǐng)日: 2017-04-27
• 公開（公告）號(hào): CN107034254B
• 公開（公告）日: 2020-08-14
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 呂洋;金城
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國科學(xué)院微生物研究所
• 主分類號(hào): C12P19/04
• 分類號(hào): C12P19/04;C08B37/00;C12R1/01
• 代理公司: 北京紀(jì)凱知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11245
• 代理人: 關(guān)暢;白艷

本發(fā)明公開了一種多糖及其制備方法。本發(fā)明提供了一種制備多糖的方法，包括如下步驟：發(fā)酵嗜鹽古菌Har.hispanic ATCC33960，得到多糖。所述發(fā)酵的條件為37℃至穩(wěn)定期。本發(fā)明的實(shí)驗(yàn)證明了，這種來自極端嗜鹽古菌的酸性多糖，其組成與已經(jīng)報(bào)道的嗜鹽古菌多糖都不盡相同，具有高硫酸根含量和高甘露糖含量的特點(diǎn)，且分子量大，在溶液中呈現(xiàn)出規(guī)則顆粒狀，有很好的延展性。在嗜鹽古菌中，該酸性多糖可以使菌落保持濕潤狀態(tài)，并且結(jié)合金屬陽離子維持嗜鹽古菌的細(xì)胞形態(tài)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種多糖及其制備方法。

背景技術(shù)

微生物產(chǎn)生多糖來適應(yīng)各種環(huán)境條件，胞外多糖可以幫助微生物生長，如粘附，存儲(chǔ)營養(yǎng)，保護(hù)層，是形成生物被膜的重要組成組分。細(xì)菌產(chǎn)生的多糖，在許多領(lǐng)域具有非常廣泛的應(yīng)用價(jià)值，如作為抗氧化劑，金屬螯合劑，乳化劑，增稠劑等。而極端古菌產(chǎn)生的多糖被研究與報(bào)道的并不多，嗜鹽古菌的生存環(huán)境很極端，其產(chǎn)生的多糖，也許更具價(jià)值。目前報(bào)道的可以產(chǎn)生胞外多糖的幾種嗜鹽古菌有Haloferax、Halococcus、Haloarcula、Natronococcus、Haloterrigena和Halobacterium，只有五種來自嗜鹽古菌的多糖，其組成與結(jié)構(gòu)被報(bào)道，而關(guān)于嗜鹽古菌多糖的生物合成途徑，知之甚少。對(duì)于嗜鹽古菌多糖及其生物合成途徑的研究，可以豐富人類對(duì)古菌的認(rèn)識(shí)，并且開發(fā)出更具價(jià)值的多糖。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的一個(gè)目的是提供一種制備多糖的方法。

本發(fā)明提供的方法，包括如下步驟：發(fā)酵嗜鹽古菌Har.hispanic ATCC33960，得到多糖。

上述方法中，所述發(fā)酵的條件為37℃培養(yǎng)至穩(wěn)定期。

上述方法中，在所述發(fā)酵后還包括如下步驟：

1)收集發(fā)酵產(chǎn)物的上清液，將上述上清液依次經(jīng)乙醇沉淀、透析、濃縮、干燥，得到干燥產(chǎn)物；

2)將所述干燥產(chǎn)物依次經(jīng)離子交換層析和凝膠層析，得到多糖。

上述方法中，所述透析采用截留量為8000-12000分子量的透析袋進(jìn)行。

上述方法中，所述離子交換層析為將所述干燥產(chǎn)物溶解后，流進(jìn)離子交換層析柱，再用離子交換層析洗脫緩沖液洗脫，收集離子交換層析產(chǎn)物；

所述離子交換層析洗脫緩沖液為含有0到2.5M NaCl的20mM NaAc水溶液；

所述離子交換層析洗脫的方式為梯度洗脫；

所述離子交換層析柱填充的介質(zhì)為DEAE-Sepharose FastFlow(購自Sigma，體積為120mL，長30cm)；

所述離子交換層析柱體積為120mL，長30cm；

所述收集離子交換層析產(chǎn)物為收集NaCl濃度在含有1.25M-1.55M NaCl的20mMNaAc水溶液；

所述凝膠層析為將所述離子交換層析產(chǎn)物二次透析后，再流進(jìn)凝膠柱，再用凝膠層析洗脫緩沖液洗脫，收集凝膠層析產(chǎn)物；

所述凝膠層析洗脫緩沖液為水，洗脫用量為150ml(1個(gè)柱體積)；

所述收集凝膠層析產(chǎn)物為收集2/15-1/3的柱體積的洗脫液(20-50ml)；

所述凝膠柱填充的介質(zhì)為Sephacryl S-400(購自GE Healthcare，150mL，長100cm)；

所述凝膠柱體積為150mL，長100cm；

所述二次透析采用截留量為14000Da的透析袋進(jìn)行。

由上述方法制備的多糖也是本發(fā)明保護(hù)的范圍。