[發(fā)明專利]一種基于光激活的單分子熒光共振能量轉(zhuǎn)移的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710284532.6
• 申請日: 2017-04-25
• 公開（公告）號: CN106918584B
• 公開（公告）日: 2019-07-12
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 陳春來;王文娟;彭思佳
• 申請（專利權(quán)）人: 清華大學(xué)
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64
• 代理公司: 北京鴻元知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11327
• 代理人: 邸更巖

1.一種基于光激活的單分子熒光共振能量轉(zhuǎn)移的方法，其特征在于該方法按如下步驟進(jìn)行：

1)將光激活熒光染料和非光激活熒光染料分別溶解在有機(jī)溶劑中，染料終摩爾濃度為每升1-50毫摩爾；所述光激活熒光染料包括CAGE 500、CAGE552、CAGE 590或CAGE 635；所述非光激活熒光染料包括Cyanine2、Cyanine3、Cyanine5、Cyanine7、Alexa 488、Alexa 647或atto 488；

2)光激活熒光染料和非光激活熒光染料分別標(biāo)記生物樣品蛋白或核酸，生物樣品的摩爾濃度為每升10-200微摩爾，生物樣品濃度和熒光染料濃度的比例為1：1-10；生物樣品和熒光染料在4℃-37℃下反應(yīng)0.5-24小時；

3)將步驟2)反應(yīng)后的溶液加入脫鹽柱中，用緩沖液洗脫得到標(biāo)記熒光染料的生物樣品，從而去除多余的沒有標(biāo)記生物樣品的熒光染料；

4)用光激活熒光染料標(biāo)記的生物樣品作為供體，用非光激活熒光染料標(biāo)記的生物樣品作為受體；將非光激活熒光染料標(biāo)記的生物樣品固定在玻片上，之后加入濃度為每升納摩爾到每升微摩爾量級的光激活染料標(biāo)記的生物樣品，在全內(nèi)反射熒光顯微鏡下進(jìn)行成像；打開波長為200-450納米的激活光源(6)，使玻片表面附近的光激活熒光染料都轉(zhuǎn)變?yōu)榭砂l(fā)射熒光的激活態(tài)；

5)關(guān)閉激活光源，打開另一波長為450-1200納米的激發(fā)光源(7)，與表面的生物樣品結(jié)合的激活態(tài)熒光染料會被激發(fā)產(chǎn)生熒光；

6)當(dāng)光激活熒光染料標(biāo)記的供體與非光激活的熒光染料標(biāo)記的受體的距離為1nm-10nm時，通過激活和激發(fā)光源的交替照明，不斷的激活在實(shí)驗觀測過程中結(jié)合到表面的熒光染料，供體的能量就會轉(zhuǎn)移給受體，受體就會發(fā)出相應(yīng)的熒光，即熒光共振能量轉(zhuǎn)移。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種基于光激活的單分子熒光共振能量轉(zhuǎn)移的方法，其特征在于：所述的生物樣品為核酸或者蛋白。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種基于光激活的單分子熒光共振能量轉(zhuǎn)移的方法，其特征在于：步驟4)中所述每升納摩爾到每升微摩爾量級的光激活熒光染料標(biāo)記的樣品濃度為每升1納摩爾到每升100微摩爾。

4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種基于光激活的單分子熒光共振能量轉(zhuǎn)移的方法，其特征在于：步驟1)中的有機(jī)溶劑采用二甲基亞砜、二甲基甲酰胺、甲醇或乙醇。