[發明專利]一種利福昔明半抗原、人工抗原及其制備方法與應用

有效

• 申請號: 201710283528.8
• 申請日: 2017-04-26
• 公開（公告）號: CN108794507B
• 公開（公告）日: 2020-12-25
• 發明（設計）人: 秦譽;聶靖東;邢維維;劉薇;吳雨洋
• 申請（專利權）人: 北京維德維康生物技術有限公司;北京明日達科技發展有限責任公司
• 主分類號: C07D498/22
• 分類號: C07D498/22;C07K14/765;C07K14/77;C07K14/795;C07K14/47;C07K16/44;G01N33/535;G01N33/558
• 代理公司: 北京中知星原知識產權代理事務所(普通合伙) 11868
• 代理人: 艾變開

本發明公開了一種利福昔明半抗原、人工抗原及其制備方法與應用。本發明所提供的利福昔明人工抗原為將式I所示的利福昔明半抗原與載體蛋白偶聯所得的抗原。本發明所提供利福昔明人工抗原合成方法簡單，純度高和產率高，對于利福昔明抗體的制備，以及利福昔明藥物殘留檢測具有重大價值。式I。

技術領域

本發明屬于藥物殘留快速檢測領域，涉及一種利福昔明人工抗原及其制備方法與應用。

背景技術

利福昔明( Rifaximin) 屬于利福霉素類抗菌藥物，是利福霉素的半合成衍生物，主要通過與細菌依賴DNA的RNA聚合酶中β-亞單位不可逆結合來抑制細菌RNA的合成，從而達到殺菌的目的。其對革蘭氏陽性菌（如金黃色葡萄球菌、無乳鏈球菌、停乳鏈球菌、乳房鏈球菌、棒狀桿菌等）和革蘭氏陰性菌（如大腸桿菌等）均有良好的抗菌活性。

利福昔明在獸醫上主要作為奶牛干乳期乳房注入劑，用于防治奶牛干乳期乳腺炎，由于效果良好而被廣泛應用，歐盟規定利福昔明在牛奶中的殘留標示物為原型藥物，最高殘留限量（MRL）為60μg/kg，我國獸藥殘留限量中尚無關于利福昔明殘留限量的規定。

目前對于利福昔明殘留檢測方法的有液相色譜-質譜和質譜法，雖然這些方法特異性強、靈敏度高，但是操作繁瑣、儀器昂貴，不適用于大批量樣品的篩選檢測。免疫化學分析鑒于在抗原抗體的定性定量方面獨特的優勢和操作簡便快速、成本低、靈敏度較高、分析樣本量大的優點彌補了理化分析的不足，在利福昔明的殘留檢測中起著越來越重要的作用。

影響免疫化學分析質量的根本因素是抗體的特異性與親和性，這些性質又決定于免疫半抗原分子的結構，因此免疫半抗原的分子設計與合成是產生特異性抗體和建立小分子獸藥殘留快速檢測技術的最基礎、最關鍵的步驟。

發明內容

本發明的目的是提供一種利福昔明人工抗原及其制備方法與應用。

本發明所提供的利福昔明人工抗原是在利福昔明半抗原的基礎上構建所得的抗原。

所述利福昔明半抗原屬于本發明的保護范圍，其結構如式I所示。

式I

本發明還提供了制備所述利福昔明半抗原的方法。

本發明所提供的制備所述利福昔明半抗原的方法，具體可包括如下步驟：

利福昔明原料藥加入甲醇攪拌，而后加入2M氫氧化鈉水溶液，所述利福昔明原料藥、所述甲醇和所述氫氧化鈉水溶液的配比為1500-1600 mg：25ml：2ml（如1572mg：15ml：2ml），所需反應溫度為65-70℃（如65℃）反應1-2h（如1h），獲得反應液。

20-24℃條件下用1M鹽酸調pH值后將反應液滴加到冰水中，析出黃色固體，過濾，水洗，鼓風干燥，獲得利福昔明水解中間體1339mg。其中，所述鹽酸、所述冰水、所述水的配比為4-4.5ml： 45-50ml：10-12ml（如4-4.5ml：45ml：10ml）。所述鼓風干燥為50℃條件下鼓風干燥5-6小時。

將利福昔明水解中間體與琥珀酸酐按照質量比為1250-1339mg：200-220mg（如1330mg：210mg）的比例進行反應，減壓蒸除所述吡啶，獲得利福昔明琥珀酸酯半抗原1327mg。

其中，所述反應的溫度具體可為75-80℃（如75℃），時間具體可為3-4h（如4h）。所述反應的催化劑和溶劑均為吡啶。

在所述“減壓蒸除所述吡啶”后還可包括如下步驟：向殘余物中加入水，析出黃色固體，過濾，水洗干燥，獲得所述化合物，即利福昔明半抗原（式I）。其中，所述利福昔明水解中間體、所述吡啶、所述琥珀酸酐和所述水的配比為1250-1339 mg：15ml：200-220mg：20ml（如1300mg：15ml：210mg：20ml）。