[發明專利]一種利福昔明半抗原、人工抗原及其制備方法與應用

有效

• 申請號: 201710283528.8
• 申請日: 2017-04-26
• 公開（公告）號: CN108794507B
• 公開（公告）日: 2020-12-25
• 發明（設計）人: 秦譽;聶靖東;邢維維;劉薇;吳雨洋
• 申請（專利權）人: 北京維德維康生物技術有限公司;北京明日達科技發展有限責任公司
• 主分類號: C07D498/22
• 分類號: C07D498/22;C07K14/765;C07K14/77;C07K14/795;C07K14/47;C07K16/44;G01N33/535;G01N33/558
• 代理公司: 北京中知星原知識產權代理事務所(普通合伙) 11868
• 代理人: 艾變開

1.一種化合物，其結構如式I所示：

式I。

2.制備權利要求1所述化合物的方法，包括步驟為：

步驟一：利福昔明原料藥加入甲醇攪拌，而后加入2M氫氧化鈉水溶液，所述利福昔明原料藥、所述甲醇和所述氫氧化鈉水溶液的配比為1500-1600mg：25ml：2ml，所需反應溫度為65-70℃，獲得反應液；

步驟二：20-24℃條件下用1M鹽酸調pH值在5.0-6.0后將步驟一獲得的反應液滴加到冰水中，析出黃色固體，過濾，水洗，鼓風干燥，獲得利福昔明水解中間體，所述鹽酸、所述冰水、所述水的配比為4-4.5ml：45-50ml：10-12ml；

步驟三：將利福昔明水解中間體與吡啶、琥珀酸酐按照配比為1250-1339mg：15ml：200-220mg的比例進行反應，減壓濃縮，獲得殘余物；向殘余物中加入水，析出黃色固體，過濾，水洗，鼓風干燥，獲得所述化合物利福昔明琥珀酸酯半抗原，所述利福昔明水解中間體、所述吡啶、所述琥珀酸酐和所述水的配比為1250-1350mg：15ml：200-220mg：20ml；

所述步驟一的反應時間為1-2h，所述步驟二和步驟三的鼓風干燥的溫度具體為50℃，時間具體為5-6h。

3.利福昔明抗原，為將權利要求1所述化合物與載體蛋白偶聯所得的抗原。

4.根據權利要求3所述的利福昔明抗原，其特征在于：所述載體蛋白是牛血清白蛋白、卵清蛋白、人血清白蛋白、血藍蛋白、鼠血清蛋白、甲狀腺蛋白或兔血清蛋白。

5.權利要求3或4所述的利福昔明抗原的制備方法，包括如下步驟：將權利要求1所述化合物與載體蛋白通過酰胺鍵偶聯，獲得所述利福昔明抗原；權利要求1所述化合物與所述載體蛋白偶聯的摩爾比為13.88：1。

6.根據權利要求5所述的利福昔明抗原的制備方法，其特征在于：所述方法包括如下步驟：

（1）將所述利福昔明半抗原溶解于二甲基甲酰胺中，然后加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽和N-羥基琥珀酰亞胺，20-25℃磁力攪拌反應2-3h，得到溶液I；

其中，所述利福昔明半抗原、所述二甲基甲酰胺、所述1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽、所述N-羥基琥珀酰亞胺的配比為37.63mg：1.5ml：21.5mg：13mg；

（2）將所述載體蛋白置于0.1M碳酸氫鈉緩沖液中，200rpm攪拌10min，充分溶解，得到溶液II，所述載體蛋白與所述0.1M碳酸氫鈉緩沖液的配比為33.6-50mg：3.5ml；

（3）將所述溶液I和所述溶液II混合，具體為在0-4℃條件下，1000rpm攪拌下，將溶液I逐滴加入到所述溶液II中，500rpm攪拌反應24h，得到溶液III；

（4）用0.01M PBS，pH7.2磷酸鹽緩沖液，于4℃對所述溶液III攪拌透析3天，得到所述利福昔明抗原。

7.權利要求1所述化合物或權利要求3所述利福昔明抗原的應用，其特征在于定性或定量檢測利福昔明或者制備利福昔明抗體。

8.利用權利要求3所述利福昔明抗原制備的抗體。

9.根據權利要求7所述的利福昔明抗原的應用，其特征在于制備酶聯免疫試劑盒和膠體金檢測卡，所述檢測樣本為動物肉和組織及液態奶。