[發(fā)明專利]一種富硒發(fā)酵豆粕、制備方法及應(yīng)用

有效

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• 申請日: 2017-04-26
• 公開（公告）號: CN106962594B
• 公開（公告）日: 2020-04-14
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 吳麗芳;王鈺婷;黃勝威;蔡冬清;吳正巖
• 申請（專利權(quán)）人: 中國科學(xué)院合肥物質(zhì)科學(xué)研究院
• 主分類號: C12N15/01
• 分類號: C12N15/01;C12N1/16;A23K10/12;A23K10/37;A23K50/30;A23K50/60;A23K10/26
• 代理公司: 合肥市浩智運(yùn)專利代理事務(wù)所(普通合伙) 34124
• 代理人: 王林

1.一種富硒發(fā)酵豆粕的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）富硒菌株選育

將產(chǎn)阮假絲酵母Candida utilis進(jìn)行氮離子注入誘變，經(jīng)過多次誘變篩選，獲得耐受高濃度亞硒酸鈉的酵母突變菌株，命名為C. utilis cas6；

（2）種子培養(yǎng)液制備

將產(chǎn)阮假絲酵母突變菌株C. utilis cas6接種在斜面培養(yǎng)基得到斜面菌株，然后將所述斜面菌株接種于種子培養(yǎng)基中，得到種子培養(yǎng)液；

（3）發(fā)酵培養(yǎng)

將種子培養(yǎng)液按體積百分含量8～12%的接種量接種至發(fā)酵培養(yǎng)基中，在發(fā)酵產(chǎn)物中補(bǔ)加終濃度為150～200mg/L的亞硒酸鈉，繼續(xù)發(fā)酵培養(yǎng)20～24h，獲得發(fā)酵菌液；

（4）益生菌單株菌發(fā)酵

將地衣芽孢桿菌Bacillus Lincheniforms cas58、戊糖片球菌Pediococcuspentosaceus cas138、乳酸鏈球菌Streptococcus lactis cas168這三株菌株分別單獨(dú)進(jìn)行發(fā)酵，獲得各自的益生菌發(fā)酵菌液；

（5）益生菌復(fù)合菌液制備

將富硒酵母菌C. utilis cas6、地衣芽孢桿菌B. Lincheniforms cas58、戊糖片球菌P. pentosaceus cas138、乳酸鏈球菌S. lactis cas168四株菌株的發(fā)酵菌液按照3～5：2～3：2～3：1～2的體積比混合，制得益生菌復(fù)合菌液，其中有效活菌數(shù)為8.0×10⁹～1.3×10¹⁰ cfu/ml；

（6）新鮮培養(yǎng)基添加

按質(zhì)量濃度2～3%向復(fù)合菌液中加入新鮮培養(yǎng)基質(zhì)-甘蔗糖蜜；

（7）高活性富硒豆粕的制備

將豆粕、羽毛粉、麩皮、水按重量比10：2～3：1.5～2：4～5，混合后按照重量比2～3‰比例加入步驟（6）中的制得的益生菌復(fù)合菌液混合攪拌均勻，在36～42℃恒溫下發(fā)酵36～48小時，烘干即可制成富硒豆粕。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種富硒發(fā)酵豆粕的制備方法，其特征在于，所述步驟（1）包括以下步驟：

（11）產(chǎn)朊假絲酵母Candida utilis采用YEPD培養(yǎng)平板上培養(yǎng)48～72h，挑取單菌落至含YEPD液體培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中，180～200rpm，震蕩培養(yǎng)48～72h，菌液離心洗滌，制成單細(xì)胞懸液，使細(xì)胞濃度在10⁸～10⁹個/mL；

（12）將菌懸液均勻涂布到無菌培養(yǎng)皿中，風(fēng)干制成菌膜；

（13）在N⁺注入機(jī)中進(jìn)行離子注入，能量14～18 KeV；

（14）每個菌株做6個梯度劑量，每個劑量兩個平板，N⁺注入劑量分別為4.0×10¹⁴、6.0×10¹⁴、8.0×10¹⁴、1.0×10¹⁵、1.2×10¹⁵、1.4×10¹⁵ ion/cm²，并做真空對照平板；

（15）誘變完成后，加入無菌水洗滌菌體制成菌懸液；

（16）將菌懸液稀釋10⁴～10⁸倍涂布于含亞硒酸鈉的篩選培養(yǎng)基，經(jīng)過多次誘變篩選，獲得耐受高濃度亞硒酸鈉的酵母突變菌株，而且其發(fā)酵生物量在同等條件下比出發(fā)菌株提高了2倍以上，命名為C. utilis cas6。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種富硒發(fā)酵豆粕的制備方法，其特征在于，所述步驟（2）中，將產(chǎn)阮假絲酵母突變菌株C. utilis cas6接種在斜面培養(yǎng)基25～30℃培養(yǎng)24～32h得到斜面菌株，然后將所述斜面菌株接種于種子培養(yǎng)基中，25～30℃，180～200r/min，振蕩培養(yǎng)24～36h，得到種子培養(yǎng)液。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種富硒發(fā)酵豆粕的制備方法，其特征在于，所述斜面培養(yǎng)基包括以下成分：葡萄糖15～20g/L，蛋白胨15～20g/L, 酵母膏5～10g/L, 亞硒酸鈉20～30mg/L，瓊脂12～18g/L。