[發(fā)明專利]人血漿中沙格列汀和5-羥基沙格列汀的LC-MS/MS高通量檢測方法

有效

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• 申請日: 2017-04-26
• 公開（公告）號: CN107045031B
• 公開（公告）日: 2019-05-28
• 發(fā)明（設計）人: 鈕小英;楊勇;鐘勘
• 申請（專利權）人: 蘇州海科醫(yī)藥技術有限公司
• 主分類號: G01N30/06
• 分類號: G01N30/06;G01N30/02
• 代理公司: 蘇州唯亞智冠知識產(chǎn)權代理有限公司 32289
• 代理人: 李麗

本發(fā)明涉及一種人血漿中沙格列汀和5?羥基沙格列汀的LC?MS/MS高通量檢測方法；本方法是取待測血漿樣品混入內(nèi)標溶液，內(nèi)標溶液為乙腈：水(50:50，v/v)配制成的同位素標記物¹³CD₂?沙格列汀和¹³CD₂?5?羥基沙格列汀濃度分別為5.00和10.0ng/mL的混合溶液，加入CHAPS水溶液后渦流并加熱，再加入乙腈后渦流并離心，取上清液，氮氣吹干后，加入復溶液進行復溶，復溶液為乙腈：水：甲酸體積比為95:5:0.1的混合液，得到待測樣品，進行LC?MS/MS分析；本發(fā)明的優(yōu)點在于：該方法滿足了臨床大批量樣品分析的需求，與現(xiàn)有技術相比具有操作簡單、提取時間短、適合高通量樣品預處理的特點。

技術領域

本發(fā)明涉及一種生物樣品中列汀類藥物的分析檢測方法，尤其涉及一種人血漿中沙格列汀和5-羥基沙格列汀的LC-MS/MS高通量檢測方法。

背景技術

近年來，我國糖尿病的患病率有明顯上升趨勢，其中以2型糖尿病為主，沙格列汀是一種二肽基肽酶4(DPP4)競爭性抑制劑，可降低腸促胰島激素的失活速率，增高其血液濃度，從而以葡萄糖依賴性的方式降低2型糖尿病患者空腹和餐后的血糖濃度；從目前查閱國內(nèi)外相關文獻看來，測定生物樣品中列汀類藥物的分析方法主要有高效液相紫外檢測法(HPLC-UV)和液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法(LC-MS/MS)，其中HPLC-UV具有操作簡單和測試成本低廉等特點，但是該類方法靈敏度較低，無法用于低劑量的藥代動力學和生物等效性研究；LC-MS/MS是以質(zhì)譜為檢測手段的色譜技術，它將高效液相色譜的分離能力與質(zhì)譜儀的檢測和結構分析功能巧妙結合，具有其它儀器不可比擬的高靈敏度和高選擇性，在運行多級反應監(jiān)測(MRM)模式時最佳，測定藥物濃度可達到pg水平，已成為國內(nèi)外進行藥代動力學和生物等效性研究最強有力的分析工具之一。

目前有數(shù)篇文獻使用LC-MS/MS技術檢測血漿中沙格列汀和5-羥基沙格列汀濃度，檢測方法主要應用于臨床及非臨床藥動學研究，樣品提取方法涵蓋了蛋白沉淀法、固相萃取法和液-液提取法，靈敏度最低可達50pg/mL；另外，有文獻報道沙格列汀在血漿中與血漿中的二肽基肽酶4(DPP4)結合，產(chǎn)生特異性吸附，這種吸附在低藥物濃度血漿樣品比較明顯，容易導致人血漿中測得的沙格列汀濃度偏低，因此，亟待開發(fā)一種簡便快速、精確度高的樣品前處理方法，結合LC-MS/MS色譜技術，縮短運行時間的同時實現(xiàn)高通量。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明目的在于提供了一種簡便快速、精度高，適合大批量樣品檢測的人血漿中沙格列汀和5-羥基沙格列汀的LC-MS/MS高通量檢測方法。

為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供了一種人血漿中沙格列汀和5-羥基沙格列汀的LC-MS/MS高通量檢測方法，包括以下步驟：

S1、血漿樣品前處理：取待測血漿樣品混入內(nèi)標溶液，加入CHAPS水溶液后渦流并加熱，再加入乙腈后渦流并離心，取上清液，氮氣吹干后，加入復溶液進行復溶，得到待測樣品；所述內(nèi)標溶液為以乙腈：水(50:50，v/v)制成的同位素標記物¹³CD₂-沙格列汀和¹³CD₂-5-羥基沙格列汀濃度分別為5.00和10.0ng/mL的混合溶液，所述復溶液為乙腈：水：甲酸體積比為95:5:0.1的混合液；

S2、采用LC-MS/MS法測定待測樣品中沙格列汀、5-羥基沙格列汀、¹³CD₂-沙格列汀和¹³CD₂-5-羥基沙格列汀的濃度：

I.LC條件：HILIC親水色譜柱：100mm×3.0m，3μm；柱溫：40℃；進樣體積：5μL；流動相A：含有0.2％甲酸的5mM醋酸銨水溶液；流動相B：乙腈，采用體積比為10：90的A：B相等梯度洗脫；