[發明專利]人血漿中沙格列汀和5-羥基沙格列汀的LC-MS/MS高通量檢測方法

有效

• 申請號: 201710281383.8
• 申請日: 2017-04-26
• 公開（公告）號: CN107045031B
• 公開（公告）日: 2019-05-28
• 發明（設計）人: 鈕小英;楊勇;鐘勘
• 申請（專利權）人: 蘇州海科醫藥技術有限公司
• 主分類號: G01N30/06
• 分類號: G01N30/06;G01N30/02
• 代理公司: 蘇州唯亞智冠知識產權代理有限公司 32289
• 代理人: 李麗

1.一種人血漿中沙格列汀和5-羥基沙格列汀的LC-MS/MS高通量檢測方法，其特征在于：包括以下步驟：

S1、血漿樣品前處理：取待測血漿樣品混入內標溶液，加入CHAPS水溶液后渦流并加熱，再加入乙腈后渦流并離心，取上清液，氮氣吹干后，加入復溶液進行復溶，得到待測樣品；所述內標溶液為分別以乙腈以及體積比為50:50的乙腈和水溶解并定容配制成的同位素標記物¹³CD₂-沙格列汀和¹³CD₂-5-羥基沙格列汀濃度均約為0.700mg/mL的內標貯備液；所述復溶液為乙腈：水：甲酸體積比為95:5:0.1的混合液；

S2、采用LC-MS/MS法測定待測樣品中沙格列汀、5-羥基沙格列汀、¹³CD₂-沙格列汀和¹³CD₂-5-羥基沙格列汀的濃度：

I.LC條件：HILIC親水色譜柱：100mm×3.0m，3μm；柱溫：40℃；進樣體積：5μL；流動相A：含有0.2％甲酸的5mM醋酸銨水溶液；流動相B：乙腈，采用體積比為10：90的A相和B相進行等梯度洗脫；

II.MS條件：離子源：大氣壓化學電離源APCI；霧化電流：3.0μA；離子源溫度：500℃；CUR：30psi；掃描模式：正離子多反應監測+MRM；掃描范圍：m/z 50～400；

S3、標準曲線的繪制：稱取沙格列汀和5-羥基沙格列汀，沙格列汀以乙腈溶解并定容，5-羥基沙格列汀以體積比為50:50的乙腈和水溶解并定容，配制成濃度約為1.00mg/mL的貯備液，以體積比為30:10的乙腈和水逐級稀釋得到混合標準系列工作溶液，以人空白血漿稀釋該工作溶液，制成標準液，以上述LC-MS-MS條件分別檢測所述標準液，并根據檢測結果繪制相應的沙格列汀和5-羥基沙格列汀的標準曲線。

2.根據權利要求1所述的人血漿中沙格列汀和5-羥基沙格列汀的LC-MS/MS高通量檢測方法，其特征在于：所述步驟S1中所述的CHAPS水溶液為5％CHAPS水溶液。

3.根據權利要求1所述的人血漿中沙格列汀和5-羥基沙格列汀的LC-MS/MS高通量檢測方法，其特征在于：所述步驟S1中渦流的時間均為2min，室溫下渦流的轉速均為4500rpm。

4.根據權利要求1所述的人血漿中沙格列汀和5-羥基沙格列汀的LC-MS/MS高通量檢測方法，其特征在于：所述步驟S1中加熱的時間為5min，加熱的溫度為55℃。

5.根據權利要求1所述的人血漿中沙格列汀和5-羥基沙格列汀的LC-MS/MS高通量檢測方法，其特征在于：所述步驟S2中的LC條件還包括自動進樣器溫度為室溫，流動相的流速為0.7mL/min。

6.根據權利要求1所述的人血漿中沙格列汀和5-羥基沙格列汀的LC-MS/MS高通量檢測方法，其特征在于：所述步驟S2中正離子多反應監測的沙格列汀m/z 316.3→180.0，¹³CD₂-沙格列汀m/z 319.4→180.0，5-羥基沙格列汀m/z 332.3→196.0，¹³CD₂-5-羥基沙格列汀m/z 335.4→196.0，碰撞能量CE均為31eV。