[發明專利]一種動物富硒保健營養液、制備方法及應用

在審

• 申請號: 201710281364.5
• 申請日: 2017-04-26
• 公開（公告）號: CN107094991A
• 公開（公告）日: 2017-08-29
• 發明（設計）人: 黃勝威;吳麗芳;王鈺婷;蔡冬清;吳正巖
• 申請（專利權）人: 中國科學院合肥物質科學研究院
• 主分類號: A23K10/16
• 分類號: A23K10/16;A23K10/18;A23K20/20;A23K50/30;A23K50/60
• 代理公司: 合肥市浩智運專利代理事務所(普通合伙)34124
• 代理人: 王林

1.一種動物富硒保健營養液的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)富硒酵母菌株選育

將產朊假絲酵母Candida utilis進行氮離子注入多次誘變，獲得耐受高濃度亞硒酸鈉的酵母突變菌株，命名為Candida utilis cas15；

(2)酵母水解物獲得

將上述產朊假絲酵母Candida utilis cas15接種在發酵培養基中，培養得到富硒酵母培養物，收集富硒酵母培養物，離心分離洗滌后，加入混合酶制劑，酶法水解后得到富含有機硒和氨基酸的酵母水解物，干燥后制得淡黃色粉末狀產品，產品水分小于8％；

(3)益生菌單株發酵

將動物雙歧桿菌Bifidobacterium animalis cas13、枯草芽孢桿菌Bacillus subtilis cas45、納豆芽孢桿菌Bacillus natto cas78、嗜熱鏈球菌Streptococcus thermophiles cas34、乳酸片球菌Pediococcus acidilacticii cas107這五株益生菌菌株分別單獨發酵，獲得單株益生菌發酵菌液；

(4)益生菌混合液制備

將動物雙歧桿菌B.animalis cas13、枯草芽孢桿菌B.subtilis cas45、納豆芽孢桿菌B.natto cas78、嗜熱鏈球菌S.thermophiles cas34、乳酸片球菌P.acidilacticii cas107混合，制得益生菌混合液，所制得的益生菌混合液的有效活菌數為1.2×10⁹～×2.1×10⁹cfu/ml；

(5)富硒酵母水解物和益生菌復配

向步驟(4)的益生菌混合液中，按照10～15g/L的比例，加入步驟(2)的富硒酵母水解物干粉；

(6)新鮮培養基質的加入

在步驟(5)的復配混合液中加入新鮮培養基質-甘蔗糖蜜；

(7)按質量濃度0.8～1.0‰向步驟(6)中制得的益生菌混合液中加入山梨酸鉀，攪拌均勻，即制得富硒動物保健營養液。

2.根據權利要求1所述的一種動物富硒保健營養液的制備方法，其特征在于，所述步驟(1)包括以下步驟：

(11)產朊假絲酵母Candida utilis采用YEPD培養平板上培養20～24h，挑取單菌落至含YEPD液體培養基的培養瓶中，160～180rpm，震蕩培養24～36h，菌液離心洗滌，制成單細胞懸液，使細胞濃度在10⁸～10⁹個/mL；

(12)將菌懸液均勻涂布到無菌培養皿中，風干制成菌膜；

(13)在N⁺注入機中進行離子注入，能量14～18KeV；

(14)每個菌株做6個梯度劑量，每個劑量兩個平板，N⁺注入劑量分別為1.5×10¹⁴、3.0×10¹⁴、4.5×10¹⁴、6.0×10¹⁴、8.0×10¹⁴、1.0×10¹⁵ion/cm²，并做真空對照平板；

(15)誘變完成后，加入無菌水洗滌菌體制成菌懸液；

(16)將菌懸液稀釋10⁴～10⁸倍涂布于含亞硒酸鈉的篩選培養基，經過多次誘變篩選，獲得耐受高濃度亞硒酸鈉的酵母突變菌株，而且其發酵生物量在同等條件下比出發菌株提高了1倍以上，命名為Candida utilis cas15。

3.根據權利要求1所述的一種動物富硒保健營養液的制備方法，其特征在于，所述步驟(2)中，富硒酵母培養物的制備方法如下：將產朊假絲酵母Candida utilis cas15接種在發酵培養基中，28℃、160～180r/min、振蕩培養48～72h，得到富硒酵母培養物。

4.根據權利要求1所述的一種動物富硒保健營養液的制備方法，其特征在于，所述步驟(2)中，發酵培養基包括麥芽抽提物10～20g/L，蛋白胨10～15g/L，酵母膏5～10g/L，亞硒酸鈉100～180mg/L。