[發明專利]EB病毒感染淋巴細胞亞群的鑒定方法及其應用

有效

• 申請號: 201710275122.5
• 申請日: 2017-04-24
• 公開（公告）號: CN106947835B
• 公開（公告）日: 2018-10-23
• 發明（設計）人: 王昭;高卓;王旖旎;張嘉;王晶石;吳林
• 申請（專利權）人: 首都醫科大學附屬北京友誼醫院
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;G01N15/14;G01N21/64;C12R1/93
• 代理公司: 北京超凡志成知識產權代理事務所(普通合伙) 11371
• 代理人: 許洪潔

本發明提供了一種EB病毒感染淋巴細胞亞群的鑒定方法及其應用，涉及醫學檢測的技術領域。本發明提供的EB病毒感染淋巴細胞亞群的鑒定方法，通過分選EBV感染患者外周血的單核細胞，聯合流式細胞技術及實時熒光定量PCR技術，可以準確定位EBV感染的細胞類型，有助于臨床醫生針對EBV感染的細胞類型制定治療方案，對EBV感染造成的疾病進行高效、準確的治療；另外，應用本發明提供的鑒定方法，可以確定EBV感染的靶細胞，能夠指導相關治療藥物的制備，有針對性的制備靶向藥物。

技術領域

本發明涉及醫學檢測技術領域，尤其是涉及一種EB病毒感染淋巴細胞亞群的鑒定方法及其應用。

背景技術

EB病毒(Epstein-Barr virus,EBV)屬于人類皰疹病毒第四型，于1964年由Epstein和Barr在研究非洲兒童惡性淋巴瘤時發現。EB病毒是一種嗜淋巴細胞病毒，是人類普遍感染的病毒之一，感染全球超過90％的人群。EB病毒因兼具較高感染率和致癌率，已于1997年被國際癌癥研究中心定為I類致癌物。

目前，已存在一些EB病毒的檢測試劑盒，但其檢測的多是全血的EB病毒感染情況，不具有針對性。

有鑒于此，特提出本發明。

發明內容

本發明的第一個目的在于提供一種EB病毒感染淋巴細胞亞群的鑒定方法，本發明的第二個目的在于提供EB病毒感染淋巴細胞亞群的鑒定方法的應用，以緩解現有技術中存在的EB病毒檢測針對性差的技術問題。

本發明提供了一種EB病毒感染淋巴細胞亞群的鑒定方法，所述鑒定方法包括以下步驟：

步驟(a)，提取人外周血單個核細胞；

步驟(b)，對所述人外周血單個核細胞進行分選，分別得到不同亞群分型的淋巴細胞；

步驟(c)，用流式細胞儀驗證分選得到的所述不同亞群分型的淋巴細胞的純度；

步驟(d)，分別提取所述不同亞群分型的淋巴細胞的DNA，并應用實時熒光定量PCR技術測定所述不同亞群分型的淋巴細胞中EB病毒DNA的含量。

進一步的，所述不同亞群分型的淋巴細胞包括：CD3⁺T淋巴細胞、CD4⁺T淋巴細胞、CD8⁺T淋巴細胞、CD19⁺B淋巴細胞以及CD56⁺NK細胞。

進一步的，步驟(b)中，所述分選包括基于磁珠的分選。

進一步的，步驟(b)中，所述分選包括基于流式細胞儀的分選。

進一步的，所述基于磁珠的分選包括：將所述外周血單個核細胞按照1:1:1:2:2的比例分為五份，分別加入能夠與CD3⁺T淋巴細胞、能夠與CD4⁺T淋巴細胞、能夠與CD8⁺T淋巴細胞、能夠與CD19⁺B淋巴細胞以及能夠與CD56⁺NK細胞特異性結合的磁珠，然后分別利用磁力架進行分選。

進一步的，所述基于流式細胞儀的分選包括：在所述外周血單個核細胞中加入抗CD3抗體、抗CD4抗體、抗CD8抗體、抗CD19抗體以及抗CD56抗體，孵育后過流式細胞儀進行分選。

進一步的，步驟(c)中，所述純度合格的標準為90％以上。

另外，本發明還提供了鑒定方法在確定EB病毒感染疾病的治療靶點中的應用。

另外，本發明還提供了鑒定方法在指導制備治療EB病毒感染疾病的藥物中的應用。