[發明專利]EB病毒感染淋巴細胞亞群的鑒定方法及其應用

有效

• 申請號: 201710275122.5
• 申請日: 2017-04-24
• 公開（公告）號: CN106947835B
• 公開（公告）日: 2018-10-23
• 發明（設計）人: 王昭;高卓;王旖旎;張嘉;王晶石;吳林
• 申請（專利權）人: 首都醫科大學附屬北京友誼醫院
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;G01N15/14;G01N21/64;C12R1/93
• 代理公司: 北京超凡志成知識產權代理事務所(普通合伙) 11371
• 代理人: 許洪潔

1.一種用于指導制備治療EB病毒感染疾病的藥物的EB病毒感染淋巴細胞亞群的鑒定方法，其特征在于，所述鑒定方法包括以下步驟：

步驟(a)，提取人外周血單個核細胞；

步驟(b)，對所述人外周血單個核細胞進行分選，分別得到不同亞群分型的淋巴細胞；

步驟(c)，用流式細胞儀驗證分選得到的所述不同亞群分型的淋巴細胞的純度；

步驟(d)，分別提取所述不同亞群分型的淋巴細胞的DNA，并應用實時熒光定量PCR技術測定所述不同亞群分型的淋巴細胞中EB病毒DNA的含量；

其中，步驟(b)中，所述不同亞群分型的淋巴細胞包括：CD3⁺T淋巴細胞、CD4⁺T淋巴細胞、CD8⁺T淋巴細胞、CD19⁺B淋巴細胞以及CD56⁺NK細胞；

所述分選包括基于磁珠的分選；和/或，所述分選包括基于流式細胞儀的分選；

所述基于磁珠的分選包括：將所述外周血單個核細胞按照1:1:1:2:2的比例分為五份，分別加入能夠與CD3⁺T淋巴細胞、能夠與CD4⁺T淋巴細胞、能夠與CD8⁺T淋巴細胞、能夠與CD19⁺B淋巴細胞以及能夠與CD56⁺NK細胞特異性結合的磁珠，然后分別利用磁力架進行分選。

2.根據權利要求1所述的鑒定方法，其特征在于，所述基于流式細胞儀的分選包括：在所述外周血單個核細胞中加入抗CD3抗體、抗CD4抗體、抗CD8抗體、抗CD19抗體以及抗CD56抗體，孵育后過流式細胞儀進行分選。

3.根據權利要求2所述的鑒定方法，其特征在于，步驟(c)中，所述純度合格的標準為90％以上。

4.權利要求1-3任一項所述的鑒定方法在確定EB病毒感染疾病的治療靶點中的應用。

5.權利要求1-3任一項所述的鑒定方法在指導制備治療EB病毒感染疾病的藥物中的應用。