[發(fā)明專利]以脫脂小麥胚芽為原料制備免疫球蛋白和免疫活性肽的方法在審
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 201710272860.4 | 申請(qǐng)日： | 2017-04-24 |
| 公開（公告）號(hào)： | CN107163139A | 公開（公告）日： | 2017-09-15 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 吳暉;武文佳;賴富饒;張猛猛;閔甜;李曉鳳 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 華南理工大學(xué) |
| 主分類號(hào)： | C07K16/00 | 分類號(hào)： | C07K16/00;C12P21/06;C07K1/36;C07K1/30;C07K1/16;C07K1/14 |
| 代理公司： | 廣州粵高專利商標(biāo)代理有限公司44102 | 代理人： | 何淑珍 |
| 地址： | 510000 廣*** | 國(guó)省代碼： | 廣東;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 脫脂 小麥 胚芽 原料 制備 免疫球蛋白 免疫 活性 方法 | ||
1.以脫脂小麥胚芽為原料制備免疫球蛋白和免疫活性肽的方法，其特征在于，取脫脂小麥胚芽為原料，經(jīng)過(guò)鹽提酸沉，透析及冷凍干燥得到免疫球蛋白；用蛋白酶對(duì)球蛋白進(jìn)行水解、大孔樹脂吸附與解離，濃縮及冷凍干燥，獲得水解度為9.1%-20.1%，分子量低于1450Da，蛋白含量為72.2%-84.6%，可溶性肽得率為40.3%-69.3%的球蛋白免疫活性肽。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述以脫脂小麥胚芽為原料制備免疫球蛋白和免疫活性肽的方法，其特征在于，包括如下步驟：
（1）小麥胚芽球蛋白的制備：將過(guò)100-300目的脫脂小麥胚芽粉以1：10-1:30w/v的比例加入水，在20-40℃下攪拌1-3h，6000-9000r/min低溫離心10-20min后，將沉淀繼續(xù)以1：10-1:30w/v的比例添加50-100mM Tris-HCl，所述Tris-HCl中含0.3-0.5M NaCl的溶液，所述Tris-HCl 的pH 為8.0，同樣在20-40℃下攪拌1-3h，6000-9000r/min低溫離心10-20min；獲得的上清液用0.1-1M的HCl調(diào)pH至4.0，6000-9000r/min低溫離心10-15min后，復(fù)溶并調(diào)pH至7.0，然后透析并冷凍干燥，得到麥胚球蛋白；
（2）酶解：將上述所得麥胚球蛋白配成質(zhì)量百分比濃度為4%-5%的蛋白溶液，在90-95℃保溫5-10min，再冷卻至37-55℃，用0.1-1M NaOH調(diào)節(jié)pH,使pH值在7.5-8.0，加入胰蛋白酶、堿性蛋白酶或中性蛋白酶，在37-55℃水浴下水解3h，反應(yīng)過(guò)程中不斷加入1M的NaOH，使pH保持不變，水解完成后，調(diào)節(jié)pH至7.0，95-100℃滅酶5-10min，冷卻后，6000-9000r/min離心5-10min，保留上清液并冷凍干燥，得到多肽；
（3）大孔樹脂吸附與解離：將上述得到的多肽配成濃度為10-30g/L的溶液，吸附到大孔樹脂后，用水洗脫至流出液的吸光值與水接近，再用75%的乙醇洗脫，收集，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)后冷凍干燥，得到免疫活性肽。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述以脫脂小麥胚芽為原料制備免疫球蛋白和免疫活性肽的方法，其特征在于，所述脫脂小麥胚芽粉的蛋白含量25-30%，水分含量為5-10%，灰分含量為5-10%。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述以脫脂小麥胚芽為原料制備免疫球蛋白和免疫活性肽的方法，其特征在于，所述水包括蒸餾水、純凈水、去離子水中的任意一種。
5.根據(jù)權(quán)利要求2所述以脫脂小麥胚芽為原料制備免疫球蛋白和免疫活性肽的方法，其特征在于，所述透析中使用的水包括蒸餾水、純凈水、去離子水、自來(lái)水中的任意一種。
6.根據(jù)權(quán)利要求2所述以脫脂小麥胚芽為原料制備免疫球蛋白和免疫活性肽的方法，其特征在于，堿性蛋白酶為液體或固體的任意一種；所述堿性蛋白酶、胰蛋白酶和中性蛋白酶的添加量滿足：每1kg底物加入107U的酶。
7.根據(jù)權(quán)利要求2所述以脫脂小麥胚芽為原料制備免疫球蛋白和免疫活性肽的方法，其特征在于，所述大孔樹脂選自DA201-C型號(hào)大孔樹脂。
8.根據(jù)權(quán)利要求2所述以脫脂小麥胚芽為原料制備免疫球蛋白和免疫活性肽的方法，其特征在于，所述麥胚球蛋白的蛋白含量為85.3%，分子量主要分布在37kDa和55kDa，必需氨基酸與總氨基酸的比值（E/T）為42.49%，蛋白質(zhì)消化率校正后的氨基酸分?jǐn)?shù)（PDCAAS）為0.42。
9.根據(jù)權(quán)利要求2所述以脫脂小麥胚芽為原料制備免疫球蛋白和免疫活性肽的方法，其特征在于，所述免疫活性肽的水解度為9.1%-20.1%，分子量低于1450Da，蛋白含量為72.2%-84.6%，可溶性肽得率為40.3%-69.3%。
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