[發明專利]一種動物防御素保健制品及用途

在審

• 申請號: 201710271995.9
• 申請日: 2017-04-24
• 公開（公告）號: CN107136306A
• 公開（公告）日: 2017-09-08
• 發明（設計）人: 楊玉榮;姜義寶;周曉秋;于廣成;尹清強
• 申請（專利權）人: 河南農業大學
• 主分類號: A23K10/20
• 分類號: A23K10/20;A61K38/17;A61P37/04
• 代理公司: 鄭州紅元帥專利代理事務所(普通合伙)41117
• 代理人: 楊妙琴

技術領域：

本發明屬于動物保健用品，具體就是一種動物使用的防御素保健制劑品。

背景技術：

防御素(Defensins)是生物體在抵御病原微生物侵襲的防御反應過程中產生的一種基本物質，分子量一般在4KD-10KD之間。防御素的功能和應用情況如下：

(1)防御素在機體的防御系統中起重要作用

動物每天會直接接觸、食入、吸入大量的病原微生物而不患感染性疾病，這種抵抗外來致病微生物的能力主要是通過天然免疫的防御機制得以實現的。防御素是所有物種中天然防御機制的重要組成部分，具有廣譜的抗菌活性，能殺滅革蘭氏陰性菌及陽性菌、真菌、寄生蟲、腫瘤細胞以及一些囊膜病毒如HIV、肝炎病毒等。防御素通過趨化作用參與機體的獲得性免疫過程，實驗證明a-防御素能夠吸引T細胞，有趨化作用，使之回流至炎癥部位，從而在細胞免疫反應中發揮作用。防御素的趨化作用有利于炎癥效應細胞及效應分子向感染部位的回流，使機體能更有效的殺滅病原微生物。防御素還具有提高動物免疫水平和特異性免疫抗體水平，調節動物的生長發育。從另一方面來講，防御素也是獲得性免疫反應中效應細胞的重要活性介質，例如在B細胞能合成防御素，對入侵的病源微生物起直接殺菌作用，所以防御素是天然免疫與機體獲得性免疫的橋梁，在機體抵御外來病原微生物的入侵中起著重要的作用。

(2)防御素有重要的應用價值

防御素對很多病原微生物有殺滅作用，包括一些抗生素耐藥株，它們能快速殺滅病原微生物而不易產生耐藥的突變株，還能促進動物生長，誘導動物的獲得性免疫。防御素與一些傳統的抗生素、其他抗菌分子、溶菌酶有協同作用。因此更多的研究焦點是將其發展為新的抗微生物藥，應用在治療感染，食品防腐劑，飼料添加劑等領域。

發明內容

為了充分發揮防御素的抗病原微生物的作用，本發明的目的是提供一種利用鴕鳥皮膚提取制作的動物防御素保健制品。

本發明的技術方案是以下述方式實現的：

一種動物防御素保健制品：它是以液氮冷凍的生鮮鴕鳥皮膚為原料、經過下述制作步驟：

(1)將液氮冷凍的生鮮鴕鳥皮膚置5％～5.5％乙酸冰水混合物中混合、勻漿、水浴、離心、上清液浸提過夜；

(2)將步驟(1)中的沉淀物用等體積5％～5.5％乙酸混合，再次攪拌浸提過夜，離心取上清液：

(3)合并步驟(1)、(2)中的兩次上清液，調整pH值至6.0，離心，保留上清液；

(4)將上清液上樣于Sephadex G-100凝膠柱，用乙酸鈉洗脫，經核酸蛋白檢測儀檢測后，自動收集器收集，通過瓊脂糖彌散方法檢測各收集管液體對大腸桿菌的抗菌活性，收集有抑菌作用的洗脫液，真空冷凍干燥保存，真空度-60KPa～-75KPa、冷凍干燥溫度為-10℃～-15℃、時間為18h～20h，制得防御素制品上述步驟1中液氮冷凍的生鮮鴕鳥皮膚重量與乙酸冰水混合物的體積比按1:10～15，上述步驟1中水浴的溫度為95℃～100℃滅活樣品中的其他微生物、時間為10min～12min，然后迅速冷卻至室溫；

上述步驟4中乙酸鈉水溶液濃度為0.20mol/L～0.25mol/L。

上述步驟中(1)：

所述的液氮冷凍的生鮮鴕鳥皮膚冷凍需先剪碎；所述的離心速度為4000r/min、時間為40min。

上述步聚4中：

所述的自動收集器收集，每4分鐘收集一管，每管1.6mL。

上述步聚4中：

所述的乙酸鈉水溶液濃度為0.2mol/L，恒流泵的速度為4滴/分，經核酸蛋白檢測儀檢測后有OD值，收集值在0.3～0.6的收集管，意味著有蛋白。

上述防御素制品在制備動物保健食品中的應用。

本發明人發現：低溫/室溫保存對防御素空間結構影響較大，易失活。有抑菌作用的洗脫液經真空冷凍可有效保存其活

防御素的活性檢測:

鴕鳥皮膚經乙酸浸提，Sephadex G-100葡聚糖凝膠分離后，出現兩個峰，選用大腸桿菌和金黃色葡萄球菌進行體外抗菌活性試驗。結果表明：提取的抗菌肽對G+和G-都有抑菌作用，且抑菌作用的主要在第二峰，但皮膚抗菌肽對大腸桿菌的抑菌結果更明顯。1g鴕鳥皮膚經乙酸(1:10W/V)提取后，一般可得到12ml提取液。Sephadex G-100每次分離2ml提取液，一般得到5ml有抑制細菌活性的洗脫液，經真空冷凍干燥，可得到約5mg含有少量的乙酸鈉鹽成分及一些雜蛋白的蛋白成分，有效抑菌濃度為3.2-6.4mg/ml。