[發(fā)明專利]一種鑒別荊條蜜與糖漿摻假荊條蜜的分析方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710269827.6
• 申請(qǐng)日: 2017-04-24
• 公開（公告）號(hào): CN107192770B
• 公開（公告）日: 2020-04-17
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王駿;耿越;宿書芳;江瑤;祝建華;王凱利
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 山東省食品藥品檢驗(yàn)研究院
• 主分類號(hào): G01N30/02
• 分類號(hào): G01N30/02;G01N30/14
• 代理公司: 濟(jì)南圣達(dá)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 37221
• 代理人: 董潔

1.一種篩選區(qū)別于糖漿的真荊條蜜標(biāo)志性代謝物的方法，其特征是，包括以下步驟：

對(duì)荊條蜜樣品與糖漿分別采用有機(jī)溶劑進(jìn)行前處理后，應(yīng)用超高效液相色譜-四極桿-軌道阱高分辨質(zhì)譜方法實(shí)現(xiàn)對(duì)前處理后的樣品中的化學(xué)成分的分離與測(cè)定，然后對(duì)得到荊條蜜樣品與糖漿的UHPLC-MS原始數(shù)據(jù)進(jìn)行預(yù)處理，最后應(yīng)用多元統(tǒng)計(jì)分析方法主成分分析模型進(jìn)行差異化合物篩選，確定和鑒定標(biāo)志性代謝物；

超高效液相色譜條件為：采用十八烷基鍵合硅膠柱（C18柱）；流動(dòng)相：A相：乙腈，B相：醋酸銨水溶液，梯度洗脫流程：0-2min 1% A, 2-3.25min 1%-5% A，3.25-4.25min 5% A,4.25-7.75min 5%-55% A, 7.75-9.75min 55%-90% A, 9.75-11.75min 90% A, 11.75-12min 90%-1% A, 12-15min 1% A；流速：0.2~0.5mL/min，柱溫30~37℃；

所述糖漿包括大米糖漿、玉米糖漿、甜菜糖漿、復(fù)合果葡糖漿、網(wǎng)購(gòu)蜂蜜專用糖漿或其它糖漿；

樣品前處理中采用的有機(jī)溶劑是含有甲酸的甲醇和水的混合溶劑；

甲酸的體積分?jǐn)?shù)為1%，甲醇和水為等體積混合形成混合溶劑；

將得到的荊條蜜樣品與糖漿摻假荊條蜜樣品的UHPLC-MS原始數(shù)據(jù)采用CompoundsDiscoverer軟件進(jìn)行預(yù)處理，該預(yù)處理是指對(duì)總離子流圖原始數(shù)據(jù)中的色譜峰的提取、峰對(duì)齊、去噪音、未知物的檢測(cè)處理，得到各個(gè)峰的保留時(shí)間、峰高、峰面積和質(zhì)荷比數(shù)據(jù)；然后通過(guò)多元統(tǒng)計(jì)分析方法PCA得分圖的形式對(duì)區(qū)分結(jié)果進(jìn)行展示；

對(duì)篩選出來(lái)的潛在的標(biāo)志性代謝物首先進(jìn)行假陽(yáng)性離子的排除，所述假陽(yáng)性離子為返回總離子流圖中提取不到色譜峰的物質(zhì)；獲得陽(yáng)離子模式下的標(biāo)志性代謝物信息，包括分子式，分子離子準(zhǔn)確質(zhì)量數(shù)以及保留時(shí)間，準(zhǔn)確質(zhì)量數(shù)的最大偏差在5ppm以內(nèi)，保留時(shí)間偏差在0.2分鐘內(nèi)；同樣的，根據(jù)獲得的分子式，在陰離子模式下對(duì)潛在的標(biāo)志性代謝物的分子離子進(jìn)行提取，并根據(jù)陰陽(yáng)離子模式下分子離子峰單位準(zhǔn)確質(zhì)量數(shù)對(duì)潛在的標(biāo)志性代謝物進(jìn)行推測(cè)，最終獲得區(qū)別于糖漿的真荊條蜜標(biāo)志性代謝物；

篩選得到的區(qū)別于大米糖漿的荊條蜜標(biāo)志性代謝物有以下化合物組成：苯丙氨酸、亮氨酸、泛酸、對(duì)香豆酸、肉桂酸、白楊素、酪氨酸。

2.如權(quán)利要求1所述的分析方法，其特征是：將樣品與有機(jī)溶劑混合至樣品完全溶解，超聲，離心，過(guò)有機(jī)濾膜，得到可上機(jī)檢測(cè)的樣品；其中，超聲時(shí)間為10~30min；離心條件：800~1200rpm離心4~8min， 有機(jī)濾膜的孔徑為0.20~0.25μm；樣品與有機(jī)溶劑的添加比例為1g：（15~25）mL。

3.如權(quán)利要求2所述的分析方法，其特征是：1000 rpm離心5min，超聲時(shí)間為25min，有機(jī)濾膜的孔徑為0.22μm。

4.如權(quán)利要求1所述的分析方法，其特征是：所述醋酸銨水溶液的濃度為10 mM，流速為0.3mL/min，柱溫35℃，進(jìn)樣量3微升。

5.如權(quán)利要求1所述的分析方法，其特征是：質(zhì)譜條件為：分辨率，70000；鞘氣流速，40個(gè)單位；輔助氣流速，10個(gè)單位；反吹氣流速，0個(gè)單位；噴霧電壓，3.5kV；毛細(xì)管溫度，320℃；輔助氣溫度，350℃；掃描范圍，m/z：70-1050；掃描模式：全掃描。

6.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征是：在獲得載荷圖時(shí)，通過(guò)設(shè)定Ratio＞20或＜0.5，P值＜0.01，來(lái)篩選潛在的標(biāo)志性代謝物。

7.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征是：在鑒定標(biāo)志性代謝物時(shí)，通過(guò)四極桿-軌道阱高分辨質(zhì)譜的二級(jí)質(zhì)譜設(shè)定高能碰撞誘導(dǎo)裂解技術(shù)（HCD）的高能碰撞池三個(gè)能量級(jí)來(lái)尋找標(biāo)志性代謝物的碎片離子，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)荊條蜜樣本標(biāo)志性代謝物的鑒定分析。

8.權(quán)利要求1所述的區(qū)別于大米糖漿的荊條蜜標(biāo)志性代謝物在鑒別大米糖漿摻假荊條蜜中的應(yīng)用。