[發(fā)明專利]IL?2和IFNγ蛋白共表達(dá)的真核表達(dá)體系及其制備方法和應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710268102.5
• 申請(qǐng)日: 2017-04-22
• 公開（公告）號(hào): CN106929529A
• 公開（公告）日: 2017-07-07
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 郭宇;匡銘;彭穗;王晶;趙坤;彭振偉
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中山大學(xué)附屬第一醫(yī)院
• 主分類號(hào): C12N15/79
• 分類號(hào): C12N15/79;C12N15/66;C12N15/23;C12N15/26;A61K48/00;A61P35/00
• 代理公司: 佛山幫專知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙)44387
• 代理人: 胡麗琴

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物基因技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種真核表達(dá)體系及其制備方法和應(yīng)用，特別是涉及IL-2和IFNγ蛋白共表達(dá)的真核表達(dá)體系及其制備方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)

白細(xì)胞介素-2(Interleukin-2，IL-2)，又名T細(xì)胞生長(zhǎng)因子(T Cell Growth Factor，TCRF)。IL-2是在促有絲分裂素或特異性抗原刺激下，由T淋巴細(xì)胞或T淋巴細(xì)胞系產(chǎn)生的在機(jī)體免疫反應(yīng)中具有重要調(diào)節(jié)作用的一種細(xì)胞因子。IL-2是人體免疫調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)中的核心物質(zhì)，與其他免疫相關(guān)細(xì)胞因子有協(xié)同和拮抗作用，共同完成人體免疫機(jī)能的調(diào)節(jié)作用；其能夠刺激NK、CTL、LAK等細(xì)胞的活化和增殖，也能促使T淋巴細(xì)胞、NK細(xì)胞等產(chǎn)生干擾素、腫瘤壞死因子等，在抗病毒、抗細(xì)菌感染和抗腫瘤等過程中發(fā)揮重要作用。在惡性腫瘤的發(fā)病過程中，存在免疫逃避導(dǎo)致的免疫監(jiān)視功能異常。腫瘤患者體內(nèi)的淋巴細(xì)胞，如NK、CTL、LAK等，不能正常發(fā)揮對(duì)腫瘤細(xì)胞的免疫殺傷效果。而前述免疫殺傷細(xì)胞的活化和增殖均是以IL-2為基礎(chǔ)的[Dhupkar P,Gordon N.Interleukin-2:Old and New Approaches to Enhance Immune-Therapeutic Efficacy.Adv Exp Med Biol.2017；995:33-51.]。如果能夠適時(shí)提供外源IL-2，就有可能協(xié)助患者的免疫系統(tǒng)改善對(duì)體內(nèi)腫瘤細(xì)胞的免疫殺傷功能。這就是IL-2進(jìn)行腫瘤免疫治療的免疫學(xué)基礎(chǔ)。目前的IL-2體內(nèi)注射免疫治療方法只是非特異地提高患者體內(nèi)的IL-2蛋白水平，其免疫調(diào)節(jié)作用和促腫瘤殺傷能力較弱，而且缺乏特異性調(diào)節(jié)病灶腫瘤微環(huán)境IL-2水平、促進(jìn)對(duì)腫瘤細(xì)胞進(jìn)行特異性免疫治療的作用[Humrich JY,Riemekasten G.Clinical trials:The rise of IL-2 therapy-a novel biologic treatment for SLE.Nat Rev Rheumatol.2016Dec；12(12):695-696.]。

γ干擾素(IFNγ)屬于II型干擾素，是一種分泌型蛋白，分泌進(jìn)而去除信號(hào)肽后其分子由143個(gè)氨基酸組成，相對(duì)分子量為40kDa，以同源二聚體或四聚體的形式存在。IFNγ主要由T細(xì)胞和NK細(xì)胞產(chǎn)生，其基因位于人的12號(hào)染色體上。IFNγ在臨床上常用于抗病毒和抗腫瘤治療[Textor A,Listopad JJ,Wührmann LL,Perez C,Kruschinski A,Chmielewski M,Abken H,Blankenstein T,Charo J.Efficacy of CAR T-cell therapy in large tumors relies upon stromal targeting by IFNγ.Cancer Res.2014 Dec 1；74(23):6796-805.]。IFNγ的體內(nèi)應(yīng)用可實(shí)現(xiàn)對(duì)多種病毒感染的抑制，從而在免疫調(diào)控方面獲得廣泛的應(yīng)用。同時(shí)，IFNγ在體內(nèi)具有抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)，阻礙惡性腫瘤轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)的功能。臨床研究結(jié)果表明，IFNγ對(duì)白血病、黑色素瘤、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、淋巴瘤及骨髓瘤等均可以產(chǎn)生明顯的抑制效果。IFNγ主要通過調(diào)節(jié)免疫免疫細(xì)胞活性，促進(jìn)免疫系統(tǒng)對(duì)原位腫瘤細(xì)胞和轉(zhuǎn)移病灶中腫瘤細(xì)胞的殺傷，也可以通過直接誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡、壞死等方式直接殺傷腫瘤細(xì)胞，還可以通過干擾腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)周期、抑制腫瘤組織的血管生成抑制腫瘤細(xì)胞增殖。但是目前的IFNγ體內(nèi)注射治療方法只能實(shí)現(xiàn)患者體內(nèi)IFNγ蛋白水平的非特異性提高，難以實(shí)現(xiàn)對(duì)腫瘤微環(huán)境中IFNγ水平的特異性高效靶向調(diào)節(jié)[Konjevic G,Radenkovic S,Srdic T,Jurisic V,Stamatovic Lj,Milovic M.Association of decreased NK cell activity and IFNγexpression with pSTAT dysregulation in breast cancer patients.J BUON.2011 Apr-Jun；16(2):219-26.]。

發(fā)明內(nèi)容