[發明專利]一種人類HLA?B*5801基因多態性檢測試劑盒

在審

• 申請號: 201710267541.4
• 申請日: 2017-04-21
• 公開（公告）號: CN106929591A
• 公開（公告）日: 2017-07-07
• 發明（設計）人: 蔡從利;張喆;彭盼;周鵬飛
• 申請（專利權）人: 武漢友芝友醫療科技股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 北京超凡志成知識產權代理事務所(普通合伙)11371
• 代理人: 李雙艷

技術領域

本發明屬于生物技術以及醫學領域，具體而言，涉及一種人類HLA-B*5801基因檢測試劑盒。

背景技術

別嘌呤醇是治療痛風的一線藥物，是目前唯一的黃嘌呤氧化酶抑制劑，主要用于治療痛風和防止痛風性腎病、繼發性高尿酸血癥以及重癥癲癇的輔助治療。其代謝產物氧嘌呤醇通過抑制黃嘌呤氧化酶的活性(后者能使次黃嘌呤轉為黃嘌呤，再使黃嘌呤轉變成尿酸)，使尿酸生成減少，血中及尿中的尿酸含量降低到溶解度以下的水平，從而防止尿酸結石的沉積，有助于痛風結節及尿酸結晶的重新溶解。但別嘌呤醇可引起嚴重的副作用，包括Stevens-John綜合征(SJS)及中毒性表皮壞死癥(TEN)。

科學研究發現HLA-B*5801等位基因與別嘌呤醇引起的嚴重皮膚不良反應(SCARs)有很強的關聯性，而在中國人群中攜帶此等位基因的頻率較高，因此2012年美國風濕管理學會更新了痛風管理指南，其中建議使用別嘌呤醇前，對嚴重過敏反應的高危人群(中國裔漢族，韓國裔，泰國裔)，應該進行HLA-B*5801等位基因檢測。

HLA(人類白細胞抗原)可分為三類，其中編碼I類分子中的HLA-B系列抗原的HLA-B基因有上千種等位基因，HLA-B*5801等位基因是其中的一種。

日本學者研究發現PSORS1C1基因位點的SNP-rs9263726與別嘌呤醇所致的SJS/TEN相關，且該SNP與HLA-B*5801完全連鎖，這一發現為檢測HLA-B*5801等位基因找到了簡單快速的方法。

目前針對基因多態性的檢測方法很多，如直接測序法，焦磷酸測序法，高分辨率溶解曲線檢測法(High Resolution Melting Analysis，HRM)，熒光定量PCR法等。其中最常見方法為測序法，該方法費用較低，但操作耗時長且靈敏度低；高分辨率溶解曲線法對設備要求比較特殊，在臨床推廣存在一定的困難；傳統熒光定量PCR法在臨床上應用較為廣泛，但該方法檢測基因多態性一般采用Genotyping方法進行檢測，該方法對樣本類型、樣本質量以及多態性分布有一定要求，全血樣本和低濃度基因組DNA均不能進行準確檢測。因此，需要建立一種快速有效的可以直接檢測全血，同時兼容檢測低濃度基因組DNA的檢測方法。

有鑒于此，特提出本發明。

發明內容

本發明的目的在于提供一種HLA-B*5801基因多態性的檢測試劑盒，以此解決現有基因多態性檢測技術中全血樣本無法直接進行檢測，以及低濃度基因組DNA檢測效果不理想的問題。本試劑盒可用于高通量、低成本快速檢測HLA-B*5801基因多態性，其靈敏度高，特異性強，可適用于EDTA、檸檬酸鹽抗凝新鮮全血或血漿直接進行檢測，也可以適用于從EDTA、檸檬酸鹽抗凝新鮮全血或血漿中提取的人類基因組DNA的檢測。為了實現本發明的上述目的，特采用以下技術方案：

一種人類HLA-B*5801基因多態性檢測試劑盒，包括：

核苷酸序列為SEQ ID NO:1所示的正向外引物；

核苷酸序列為SEQ ID NO:2所示的反向外引物；

核苷酸序列為SEQ ID NO:3所示的用于檢測目的基因的突變位點的ARMS引物；

核苷酸序列為SEQ ID NO:4所示的用于檢測野生型位點的Taqman探針；

核苷酸序列為SEQ ID NO:5所示的用于檢測突變位點的Taqman探針。

其中SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2為普通PCR引物，擴增包含HLA-B*5801基因多態性的DNA片段；SEQ ID NO:3為ARMS引物，用于特異性擴增含有HLA-B*5801密碼子CAT的DNA片段。ARMS引物3’末端與突變型堿基配對，SEQ ID NO:3在ARMS引物的3’末端倒數第3位增加錯配堿基。

本發明提供的試劑盒用于檢測HLA-B*5801等位基因的序列號為rs9263726的SNP位點：

表1：HLA-B*5801等位基因的類型

其中，rs9263726G為野生型位點，rs9263726A為突變型位點。

與現有技術相比，本發明的有益效果為：

1).靈敏度高，可以準確檢測0.2ng基因組DNA的基因型；

2).特異性好，采用ARMS特異性引物和SNP分型探針相結合的技術，可以特異性擴增識別對應的基因型；