[發明專利]一種人類HLA?B*5801基因多態性檢測試劑盒

在審

• 申請號: 201710267541.4
• 申請日: 2017-04-21
• 公開（公告）號: CN106929591A
• 公開（公告）日: 2017-07-07
• 發明（設計）人: 蔡從利;張喆;彭盼;周鵬飛
• 申請（專利權）人: 武漢友芝友醫療科技股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 北京超凡志成知識產權代理事務所(普通合伙)11371
• 代理人: 李雙艷

1.一種人類HLA-B*5801基因多態性檢測試劑盒，其特征在于，包括：

核苷酸序列為SEQ ID NO:1所示的正向外引物；

核苷酸序列為SEQ ID NO:2所示的反向外引物；

核苷酸序列為SEQ ID NO:3所示的用于檢測目的基因的突變位點的ARMS引物；

核苷酸序列為SEQ ID NO:4所示的用于檢測野生型位點的Taqman探針；

核苷酸序列為SEQ ID NO:5所示的用于檢測突變位點的Taqman探針。

2.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述Taqman探針5’端連接有熒光報告基團，在核酸的3’端連接有熒光淬滅基團，且兩個Taqman探針的熒光報告基團不同；

所述熒光報告基團選自FAM、VIC、ROX、CY3和CY5中的任一種；所述熒光淬滅基團選自TAMRA、BHQ1、BHQ2和NFQ中的任一種。

3.根據權利要求2所述的試劑盒，其特征在于，所述Taqman探針上連接有MGB修飾基團；

優選地，所述MGB修飾基團與所述熒光淬滅基團連接。

4.根據權利要求2或3所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括內標引物和內標探針；

優選地，所述內標引物和內標探針為人源性內標；

更優選地，所述內標引物為核苷酸序列為SEQ ID NO:6所示的正向內標引物、核苷酸序列為SEQ ID NO:7所示的反向內標引物；所述內標探針的核苷酸序列為SEQ ID NO:8所示。

5.根據權利要求4所述的試劑盒，其特征在于，所述內標探針5’端連接有熒光報告基團，在核酸的3’端連接有熒光淬滅基團；所述熒光報告基團選自FAM、VIC、ROX、CY3和CY5中的任一種；所述熒光淬滅基團選自TAMRA、BHQ1、BHQ2和NFQ中的任一種；且所述內標探針與所述Taqman探針上的熒光報告基團均不同。

6.根據權利要求1～3任一項所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括弱陽性對照液和/或空白對照液；

所述弱陽性對照液為含有2種質粒的混合液，所述2種質粒分別含有2種不同的帶有待檢測突變位點的HLA-B*5801等位基因；優選地，所述質粒的濃度為2000～3000copies/μl；

所述空白對照液為Tris-HCl緩沖液；優選地，所述Tris-HCl緩沖液的濃度為7～13mM，pH為7.5～8.5。

7.根據權利要求1～3任一項所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括血液處理劑、PCR緩沖液、酶和水中的一種或多種。

8.根據權利要求7所述的試劑盒，其特征在于，所述血液處理劑為0.9％的NaCl水溶液。

9.根據權利要求7所述的試劑盒，其特征在于，所述PCR緩沖液中包括PCR添加劑、MgCl₂和dNTPs中的一種或多種；

優選地，所述PCR添加劑包括DMSO、甘油、BSA中的一種或多種；

優選地，所述dNTPs包括dATP、dGTP、dCTP、dUTP。

10.根據權利要求7所述的試劑盒，其特征在于，所述酶包括Taq酶、UNG酶；

優選地，所述Taq酶和UNG酶單獨分裝或混合制成溶液；

更優選地，當所述Taq酶和UNG酶混合制成溶液時，所述Taq酶和UNG酶的總量比為：(0.5U～1.0U)：(0.1U～0.5U)。