[發明專利]一種檢測甲氨蝶呤的ELISA試劑盒及其應用在審
| 申請號： | 201710266817.7 | 申請日： | 2017-04-21 |
| 公開（公告）號： | CN107219357A | 公開（公告）日： | 2017-09-29 |
| 發明（設計）人： | 方勇飛;牟方祥;吳紅;陳思;閆彩霞;陳欣 | 申請（專利權）人： | 中國人民解放軍第三軍醫大學第一附屬醫院 |
| 主分類號： | G01N33/543 | 分類號： | G01N33/543;G01N33/531 |
| 代理公司： | 北京眾達德權知識產權代理有限公司11570 | 代理人： | 劉杰 |
| 地址： | 400038 重*** | 國省代碼： | 重慶;85 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 檢測 蝶呤 elisa 試劑盒 及其 應用 | ||
1.一種檢測甲氨蝶呤的ELISA試劑盒，其特征在于：所述試劑盒包括如下試劑：包被甲氨蝶呤的96孔微孔板，甲氨蝶呤單克隆抗體，抗體稀釋液，HRP標記羊抗鼠二抗，甲氨蝶呤標準品，洗液濃縮液，樣本稀釋液，TMB顯色液以及終止液；
所述甲氨蝶呤單克隆抗體由保藏號為CCTCC NO:C201726的雜交瘤細胞所分泌產生。
2.根據權利要求1所述的檢測甲氨蝶呤的ELISA試劑盒，其特征在于：所述包被甲氨蝶呤的96孔微孔板的制備方法包括如下步驟：
采用包被緩沖液將包被原稀釋，將稀釋后的所述包被原加入至微孔中，以封板膜貼封，包被過夜或恒溫箱中包被溫育2-4h；
所述包被過夜或溫育后，甩掉板中液體后拍干，洗板，拍干，每孔加入封閉液，以封板膜貼封，于恒溫箱中溫育1-3h封閉；
所述封閉后，取板拍干，加入浸板液，于恒溫箱中溫育1-3h浸板；
所述浸板后，取板拍干，將板抽真空。
3.根據權利要求2所述的檢測甲氨蝶呤的ELISA試劑盒，其特征在于：所述包被原包括甲氨蝶呤-雞蛋清白蛋白。
4.根據權利要求2所述的檢測甲氨蝶呤的ELISA試劑盒，其特征在于：所述包被緩沖液包括CB緩沖液；所述洗板的洗液包括1×TBST溶液，所述封閉液包括10×PBS溶液、牛血清以及牛血清白蛋白，所述浸板液包括10×PBS溶液、蔗糖及海藻糖。
5.根據權利要求1所述的檢測甲氨蝶呤的ELISA試劑盒，其特征在于：所述抗體稀釋液包括10×PBS溶液、2％牛血清白蛋白以及10％牛血清。
6.根據權利要求1所述的檢測甲氨蝶呤的ELISA試劑盒，其特征在于：所述樣本稀釋液包括PBS溶液和溴酚紅指示劑。
7.根據權利要求1所述的檢測甲氨蝶呤的ELISA試劑盒，其特征在于：所述終止液包括2-3mol/L H 2SO 4溶液。
8.根據權利要求1所述的檢測甲氨蝶呤的ELISA試劑盒，其特征在于：所述洗液濃縮液為10×TBST溶液。
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