[發明專利]一種胎盤干細胞復合再生纖維素組織修復材料的制備方法

在審

• 申請號: 201710264299.5
• 申請日: 2017-04-21
• 公開（公告）號: CN107149704A
• 公開（公告）日: 2017-09-12
• 發明（設計）人: 張春松;吳長應
• 申請（專利權）人: 蕪湖揚展新材料科技服務有限公司
• 主分類號: A61L27/60
• 分類號: A61L27/60;A61L27/38;A61L27/20;A61L27/54
• 代理公司: 北京元本知識產權代理事務所11308
• 代理人: 范奇

技術領域

本發明屬于復合生物材料制備領域，具體涉及一種胎盤干細胞復合再生纖維素組織修復材料的制備方法。

背景技術

近年來，具有增殖和分化潛能的干細胞己經成為皮膚組織工程中好的種子細胞。胚胎干細胞在皮膚組織工程中應用研究，為構建組織工程皮膚在皮膚損傷修復的應用提供了理論依據。但是胚胎干細胞在醫學應用上存在道德倫理問題和致瘤性等限制因素，而具有多向分化潛能的多能干細胞一一間充質干細胞(Mesenchymal Stem Cells，MSCs)作為良好的種子細胞，在皮膚組織工程研究中倍受關注。以往的研究主要是集中于骨髓來源的BMSCs但BMSCs需要通過骨髓穿刺而獲得，且數量隨年齡增長而下降，這都限制了BMSCs的應用，且支架材料的選擇和應用一直影響該技術發展的重要難題。

發明內容

根據現有技術中存在問題，本發明采用新生兒娩后“廢棄物”的胎盤組織獲取CMSCs，并選用再生纖維素材料作為支架材料，制得胎盤干細胞復合再生纖維素組織修復材料。

本發明采用以下技術方案：

一種胎盤干細胞復合再生纖維素組織修復材料的制備方法，包括以下步驟：

步驟一：機械剝除胎盤羊膜組織，將剝離后剩下的絨毛組織，過質量濃度75％的酒精，再用PBS沖洗洗盡血漬，并將其剪成1mm²小塊后，浸沒于含有質量濃度0.1％的IV型膠原酶的低糖基礎培養基(L-DMEM)中，37℃消化15-45分鐘,得細胞組織液；

步驟二：細胞組織液經200目篩網過篩后轉移至干凈的離心管，1200rpm離心lOmin，棄上清液后接種于含有質量濃度10％的胎牛血清的低糖基礎培養基(L-DMEM)中，于37℃、5％CO₂的培養箱中培養5天后進行第一次換液，隨后每隔兩天進行換液，待細胞融合至90％使用質量濃度0.25％的胰酶進行消化，得胎盤絨毛膜來源間充質干細胞(CMSCs)；

步驟三：稱取0.2g殼聚糖，溶于40ml去離子水中，配制質量體積比為20％的殼聚糖溶液，另加入0.32g氯化鈉晶體及0.5ml冰醋酸，調節pH至5.0混合攪拌均勻得殼聚糖溶液；

步驟四：稱取0.2g藻酸鹽，溶于40ml去離子水中，配制質量體積比為20％的藻酸鹽溶液，另加入0.32g氯化鈉晶體，攪拌至充分溶解得藻酸鹽溶液；

步驟五：稱取棉短絨5g，將其溶解在氫氧化鋰/尿素水溶液中，配制成質量濃度4％的纖維素溶液，并加入殼聚糖溶液及藻酸鹽溶液，其中氫氧化鋰/尿素水溶液是采用氫氧化鋰8.76g、尿素12g及水79.24g配制而成；混合溶液充分攪拌均勻、過濾、靜置24h，于20kV條件下靜電紡絲得纖維膜；

步驟六：取生長狀況良好的胎盤絨毛膜來源間充質干細胞(CMSCs)接種于纖維膜上，接種時間為2-12h，即得胎盤干細胞復合再生纖維素組織修復材料。

優選的，所述的步驟一還包括：將剝離后剩下的絨毛組織制成面積為10cm²。

優選的，步驟一中所述的PBS中含有質量濃度0.1％的青-鏈霉素。

優選的，所述的步驟五還包括：將纖維膜冷凍干燥，并置于24孔板中，于放射CO⁶⁰輻射消毒。

優選的，所述的步驟五中靜電紡絲針頭內徑為0.9mm，紡絲距離在8-15cm，速度為0.1-O.5m/h。

本發明的有益效果在于：

1)胎盤絨毛膜來源間充質干細胞(CMSCs)具有較強的增殖、分化能力，且取材的便利，不涉及社會倫理等問題的優勢，其作為種子細胞在皮膚組織工程中具有極大的運用前景。

2)纖維素作為一種生物材料，具有良好的生物適應性和生物活性，能作用于創面修復的多個環節，促進創面的快速愈合。以纖維素為原料制成的傷口敷料柔軟透明、舒適；有良好的通透性，能為創面提供濕潤、微酸的修復環境；能調節創面氧張力，促進毛細血管形成，從而加速傷口的愈合。

3)殼聚糖和藻酸鹽均被視為細胞支架材料并廣泛運用在組織工程領域。殼聚糖是一種來源于海洋蟹類生物的天然多糖，生物相容性好，可降解，無毒性而且有其對耐甲氧西林金黃色葡萄球菌和大腸桿菌等均具有一定的抗菌效果。藻酸鹽除了良好生物相容性，可降解性及無毒性之外，還對細胞的粘附、遷移有促進作用。

4)本發明制得的組織修復材料，可以加快皮膚修復，具有優良的組織修復的功效。

具體實施方式

以下結合實施例對本發明作進一步的詳細說明。