[發明專利]一種胎盤干細胞復合再生纖維素組織修復材料的制備方法

在審

• 申請號: 201710264299.5
• 申請日: 2017-04-21
• 公開（公告）號: CN107149704A
• 公開（公告）日: 2017-09-12
• 發明（設計）人: 張春松;吳長應
• 申請（專利權）人: 蕪湖揚展新材料科技服務有限公司
• 主分類號: A61L27/60
• 分類號: A61L27/60;A61L27/38;A61L27/20;A61L27/54
• 代理公司: 北京元本知識產權代理事務所11308
• 代理人: 范奇

1.一種胎盤干細胞復合再生纖維素組織修復材料的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

步驟一：機械剝除胎盤羊膜組織，將剝離后剩下的絨毛組織，過質量濃度75％的酒精，再用PBS沖洗洗盡血漬，并將其剪成1mm²小塊后，浸沒于含有質量濃度0.1％的IV型膠原酶的低糖基礎培養基中，37℃消化15-45分鐘,得細胞組織液；

步驟二：細胞組織液經200目篩網過篩后轉移至干凈的離心管，1200rpm離心lOmin，棄上清液后接種于含有質量濃度10％的胎牛血清的低糖基礎培養基中，于37℃、5％CO₂的培養箱中培養5天后進行第一次換液，隨后每隔兩天進行換液，待細胞融合至90％使用質量濃度0.25％的胰酶進行消化，得胎盤絨毛膜來源間充質干細胞(CMSCs)；

步驟三：稱取0.2g殼聚糖，溶于40ml去離子水中，配制質量體積比為20％的殼聚糖溶液，另加入0.32g氯化鈉晶體及0.5ml冰醋酸，調節pH至5.0混合攪拌均勻得殼聚糖溶液；

步驟四：稱取0.2g藻酸鹽，溶于40ml去離子水中，配制質量體積比為20％的藻酸鹽溶液，另加入0.32g氯化鈉晶體，攪拌至充分溶解得藻酸鹽溶液；

步驟五：稱取棉短絨5g，將其溶解在氫氧化鋰/尿素水溶液中，配制成質量濃度4％的纖維素溶液，并加入殼聚糖溶液及藻酸鹽溶液，其中氫氧化鋰/尿素水溶液是采用氫氧化鋰8.76g、尿素12g及水79.24g配制而成；混合溶液充分攪拌均勻、過濾、靜置24h，于20kV條件下靜電紡絲得纖維膜；

步驟六：取生長狀況良好的胎盤絨毛膜來源間充質干細胞(CMSCs)接種于纖維膜上，接種時間為2-12h，即得胎盤干細胞復合再生纖維素組織修復材料。

2.根據權利要求1所述的一種胎盤干細胞復合再生纖維素組織修復材料的制備方法，其特征在于，所述的步驟一還包括：將剝離后剩下的絨毛組織制成面積為10cm²。

3.根據權利要求1所述的一種胎盤干細胞復合再生纖維素組織修復材料的制備方法，其特征在于：步驟一中所述的PBS中含有質量濃度0.1％的青-鏈霉素。

4.根據權利要求1所述的一種胎盤干細胞復合再生纖維素組織修復材料的制備方法，其特征在于，所述的步驟五還包括：將纖維膜冷凍干燥，并置于24孔板中，于放射CO⁶⁰輻射消毒。

5.根據權利要求1所述的一種胎盤干細胞復合再生纖維素組織修復材料的制備方法，其特征在于，所述的步驟五中靜電紡絲針頭內徑為0.9mm，紡絲距離在8-15cm，速度為0.1-O.5m/h。