[發(fā)明專利]一種斑茅植物根尖分生區(qū)染色體標本的制備方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710263670.6
• 申請日: 2017-04-21
• 公開（公告）號: CN106896008A
• 公開（公告）日: 2017-06-27
• 發(fā)明（設計）人: 王勤南;吳嘉云;常海龍;凌秋平;張偉;邱永生;陳俊呂;謝靜
• 申請（專利權）人: 廣東省生物工程研究所（廣州甘蔗糖業(yè)研究所）
• 主分類號: G01N1/28
• 分類號: G01N1/28
• 代理公司: 廣州市一新專利商標事務所有限公司44220
• 代理人: 唐弟,周佳

1.一種斑茅植物根尖分生區(qū)染色體標本的制備方法，其特征在于包括如下步驟：

（1） 根尖培養(yǎng)：初春，剪取斑茅幼嫩植株種植于培養(yǎng)桶內，培養(yǎng)桶的側邊及底部打孔透水，桶內底部為保水透氣基質，通過正常的水、肥及除草等栽培管理，3~4個月后斑茅的根會盤繞于桶內的四周及底部；

（2） 根尖取樣及前處理：將整植株連同基質與培養(yǎng)桶分離，挑選活性高的根尖，用手術刀或手術剪取長度約為0.5cm的根尖，放置于蒸餾水中漂洗，漂洗后投入濃度為0.002M的8-羥基喹啉水溶液、25~28℃處理3~4小時，處理后用蒸餾水洗凈，再放置于卡諾氏固定液中、4℃冰箱處理24~48小時；

（3）根尖酶解：從步驟（2）的冰箱中取出根尖，用蒸餾水漂洗2~3次，洗凈固定液后，放置于0.075M KCl溶液低滲1小時，后取出根尖并放置于含有纖維素和果膠酶的酶解混合液中酶解5~8小時，酶解后用蒸餾水洗凈后低滲1小時，轉入卡諾氏固定液固定0.5小時；

（4）染色體制片：用鑷子和手術刀將步驟（3）的根尖分生區(qū)細胞解離出，并均勻涂抹于載玻片上，晾干。

（5）鏡檢：將步驟（4）晾干的玻片放置于具有相差功能的顯微鏡鏡檢，選擇染色體形態(tài)好、分散好的細胞，做好記錄，-80℃保存?zhèn)溆谩?/p>

2.如權利要求書1所述的一種斑茅植物根尖分生區(qū)的獲取及染色體制備的方法，其特征在于所述步驟（2）的根尖取樣優(yōu)選的時期是斑茅拔節(jié)期為6-9月份，取樣時間優(yōu)選為晴天早上8:00~10:00。

3.如權利要求書1所述的一種斑茅植物根尖分生區(qū)的獲取及染色體制備的方法，其特征在于步驟（3）所述的酶解混合液的濃度，纖維素和果膠酶的質量濃度分別為3.5%和1.75%，酶解溫度為37℃。